本试剂盒仅供科研使用
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铁离子还原能力（ferric reducing ability of plasma）试剂盒说明书
（货号：WS2510F 分光法 48 样）
一、产品简介：
抗氧化物可以还原 Fe3+ -三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ，随后在
590nm 测定蓝色的 Fe2+-TPTZ 即可获得样品中的铁离子还原能力，吸光值越高表示样品
的还原能力越强。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
试剂一
液体 45mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 4.5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 4.5mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、恒温水浴锅、低温离心机、可调式移
液器、研钵、蒸馏水。
四、铁离子还原能力测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取 0.1g 样本（若是干样可取 0.02-0.05g），加入 1mL 的 80%乙醇（自备）进行匀浆，
匀浆后转入 2mL 离心管中；于 60℃，200-300W 条件下超声提取 30min（间隔 5min 振
荡混匀一次）。12000rpm，离心 10min，取上清，置冰上待测。
② 液体样本：水溶性样本可直接检测。若是油性样本，可用 80%乙醇溶解后再取上清
检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 590nm，蒸馏水调零。
② 显色液配置：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温，
现配现用，注意避光。
③ 不同样本抗氧化能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 测定超过 2，需对样本
用 80%乙醇稀释，稀释倍数 D 代入公式计算。
④ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管（只做一次）
样本
20
0
蒸馏水
100
120
显色液
680
680
混匀，室温 25℃准确反应 10min，全部液体转移至 1mL 玻
璃比色皿中，于 590nm 处读取吸光值 A；△A=A 测定-A 空
白。
【注】1. 若 A 测定值超过 2，可对样本用提取液进行稀释，或减少样本上样量 V1（如减至 10μL，
则提取液增至 110μL），则稀释倍数 D 或加样量 V1 需代入公式重新计算。
2. 若△A 的值在零附近，可增加样本量 V1（如增至 40μL，则蒸馏水相应减少），本试剂盒仅供科研使用
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则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.5138x - 0.0011，x 是标准品（FeSO4）摩尔浓度（
μmol/mL），y 是△A。
2、组织样本：
（1）按样本质量计算：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/g 重量)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷(V1÷V×W)×D
=1.95×(△A+0.0011)÷W×D
（
2）按样本蛋白浓度计算：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/mg prot)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷(V1×Cpr)×D
=1.95×(△A+0.0011)÷Cpr×D
3、液体样本：
铁离子还原能力(μmol FeSO4/mL)=[(△A+0.0011)÷0.5138×V1]÷V1×D
=1.95×(△A+0.0011)×D
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----反应中样品体积，20μL=0.02 mL；
W----样品质量，g；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr----样本蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
【注意】：
1. 由于本方法是显蓝色测定吸光值，因此尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对
本试剂盒的检测结果产生干扰。
2. 样本中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。
4. 如果样本中处理过程中施加了较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定，不宜使用本测试方法。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（100μmol/mL）：临用前加 1mL 蒸馏水，充分溶解混匀。
2
把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4 μmol/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3
按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
