本试剂盒仅供科研使用
脯氨酸(PRO)含量测定试剂盒说明书
(货号:WS1110F 分光法 48样)
一、产品简介:
植物体内游离脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性,抗旱性强的品种往往积累
较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外,由于脯氨酸亲
水性极强,能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程,因而能降低凝固点,有防止细胞脱水
的作用。在低温条件下,植物组织中脯氨酸含量增加,可提高植物的抗寒性,因此,亦可
作为抗寒育种的生理指标。
当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后与酸性茚
三酮加热反应后形成红色物质,该红色物质在 520nm 处有最大吸收峰,进而通过比色法
测定植物体内游离脯氨酸的含量。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
使用前摇匀
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
若有沉淀,50℃水浴加热两分钟
使其溶解,用前摇匀。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移
液器、冰CU酸、研钵、冰
四、脯氨酸(PRO)含量的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样
本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,
转移至 1.5mLEP 管后,于 90℃水浴振荡提取 10min;25℃×12000 rpm,离心 10min,
取上清,冷却后待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例进行提取
② 液体样本:
取0.1mL 液体样本加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,转移至 1.5mLEP 管后,于90℃
水浴振荡提取 10 分钟,12000rpm,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。
【注】若增加样本量,可按照液体体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例提取。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(
μL)
测定管
空白管(仅做一次)
样本
300
蒸馏水
300
冰CU酸
300
300
试剂一
600
600
置 95℃水浴中加热 30min(盖紧封口,防止盖子爆开水分),本试剂盒仅供科研使用
2
冷却至室温。吸取800μL澄清溶液于 1mL 玻璃比色皿(光径
1cm)中,于520nm 处读取吸光值 A,△A =A 测定-A 空白。
【注】:1. 吸光度ΔA 线性范围为 0.01-1.0,若ΔA 超过1.0 可减少样本加样量 V1(如减至150μL,则冰
CU酸相应增加),则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
2. 若ΔA值低于0.005,可增加样本家养体积V1(如增至450μL, 则冰CU酸减至为150μL),或
增加样本取样质量W,可改变后的V1和W需带入公式重新计算。
五、结果计算:
1、 标准曲线方程:y = 0.1304x - 0.0071;x 为标准品质量(
μg),y 为△A。
2、按样本质量计算:
脯氨酸(Pro)含量(μg/g 鲜重)=[(△A+0.0071)÷0.1304]÷(W×V1÷V)×D
=25.6×(△A+0.0071)÷W×D
3、按液体体积计算:
脯氨酸(Pro)含量(μg/mL)=[(△A+0.0071)÷0.1304]÷[V2×V1÷(V+V2)]×D
=281.2×(△A+0.0071)×D
V---提取液的总体积,1mL;
V1---加入反应体系提取液的体积,0.3mL;
V2---液体样品量,0.1mL;
W---样品质量,g。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):标准品溶解在 1mL 蒸馏水中,充分混匀。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0,4,8,12,16,20 μg/mL。也
可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。