本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。
使用方法
1. 样本准备
1.1 悬浮细胞 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。
或贴壁细胞用胰酶消化细胞后 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。
1.2 细胞数量为<5×10 6个时,加入 500μL 裂解液 CP。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,加入 700μL 裂 解液 CP。轻轻吹打混匀,55℃孵育 1 分钟。
1.3 12,000rpm 离心 1 分钟。
1.4 细胞数量为<5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取 650μL 上清。
1.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. RNA 纯化
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中,12,000rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中废液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CPW,12,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中废液。
2.3 重复步骤 2.2 一次。
2.4 12,000rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。
2.5 将 RNA 吸附柱放入无 DNase 无 RNase 离心管中,加入 30-50μL 洗脱液 C,室温放置 1 分钟。
2.6 12,000rpm 离心 2 分钟,得到 RNA 溶液,-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作,常换手套,防止 RNA 降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。
3. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管,防止 RNA 降解,常更换吸头,防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求,请使用 DNase I(货号 QR0102)进行基因组清除。