BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic

碧云天的BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅ Magnetic Beads (mRNA磁珠)，也称mRNA Magnetic Beads或Oligo dT磁珠(Oligo dT Magnetic Beads)，是一种使用Oligo (dT)₂₅包被的磁珠，可与mRNA等尾部的poly(A)互补配对，用于稳定、高效、便捷地直接从动物组织或培养的动物细胞中或从总RNA中快速分离纯化获得高纯度完整的带有poly(A)的mRNA等RNA的磁珠。

本产品纯化的带有poly(A)的mRNA、lncRNA等，可直接应用于RT-PCR、qPCR、高通量测序、mRNA文库的构建、mRNA的m⁶A等修饰分析、固相cDNA文库构建、Northern blot分析、RACE等分子生物学实验，还可用于mRNA疫苗的研发，如mRNA疫苗的纯化、3' Poly A尾长度检测时Poly A尾短链的分离纯化等[1-2]。

本产品分离纯化的poly(A) RNA中也可包含带有poly(A)的lncRNA等，但通常主要为mRNA，因此也常被称为mRNA磁珠。

一个典型的哺乳动物细胞中，四种主要的大分子的质量和占比为：RNA, ∼20pg (1%); DNA, ~7pg (0.3%); protein, ∼500pg (20%); polysaccharide (多糖), ∼2μg (78.7%)。信使RNA (messenger RNA, 简称mRNA) 约占总RNA质量的4%，核糖体RNA (ribosomal RNA, 简称rRNA)约占80% [3]。

本产品的原理和主要操作流程如图1所示。BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅磁珠表面共价修饰了25聚dT序列即Oligo (dT)₂₅，当真核细胞、动植物组织的裂解液或抽提的总RNA与BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅磁珠混合后，磁珠表面的寡聚dT序列与mRNA等3'端的poly(A)进行碱基配对而特异性结合，然后在外界磁场的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，经洗涤充分去除杂质，最后用洗脱液将mRNA等从磁珠上洗脱下来，即可获得高纯度完整mRNA等带有poly(A)的RNA[4-5]。

图1. BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅ Magnetic Beads (mRNA磁珠) (R0075)用于mRNA抽提的工作原理示意图。

本产品盒具有提取效果稳定、纯度高、速度快、操作便捷等优点。本产品的mRNA提取体系经过反复测试和优化，能分离纯化获得总RNA中90%以上的mRNA，能从10⁶个细胞中抽提约0.1-1µg mRNA，20mg小鼠肝组织能抽提约0.2-2µg mRNA，20mg小鼠肺组织能抽提约0.1-1µg mRNA。仅需裂解、结合、洗涤、洗脱等简单的操作，整个纯化过程不超过15分钟即可完成。所有操作都在同一个离心管中完成，操作便捷。提取的total RNA使用本产品进行mRNA的纯化效果参考图2。

图2. BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅ Magnetic Beads (mRNA磁珠) (D0075)用于从总RNA中纯化mRNA的效果图。使用RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0024)抽提293T细胞的总RNA，同时使用本产品进行mRNA的纯化，然后使用BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (D7268)进行qRT-PCR检测，使用Actin、B2M和GAPDH的三对内参引物对比总RNA (Total RNA)和纯化的mRNA的Ct值。图中可见mRNA纯化前后的Ct值基本一致，说明mRNA的纯化效果接近100%。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品磁珠粒径约为200nm，浓度约为5mg/ml。每毫克磁珠偶联的Oligo (dT)₂₅约为300-400pmol，每毫克磁珠可纯化约2-3µg mRNA等poly(A) RNA，即每毫升磁珠可以纯化约10-15µg mRNA等poly(A) RNA。

对于常规的mRNA纯化，按照每个样品使用20μl磁珠悬浊液，每1ml本磁珠可用于50次mRNA纯化。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R0075-1ml	BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads	1ml
R0075-5ml	BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads	5ml
R0075-20ml	BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads	20ml
R0075-100ml	BeyoMag™ Oligo (dT)25 Magnetic Beads	100ml
—	说明书	1份

保存条件：

4℃保存，一年有效。其中BeyoMag™ Oligo (dT)₂₅磁珠长期不使用时，可以-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。

注意事项：

操作过程要严格保证无RNA酶和DNA酶污染。对于操作环境中RNase的去除，推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。

本产品的所用试剂和耗材都要求是RNase-free和DNase-free的，操作时应小心，避免被污染。如果耗材可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。如果可能有DNase污染，通常高温高压灭菌可以使DNase灭活。

需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的BeyoMag™磁分离架系列产品(FMS004、FMS008、FMS012、FMS016或FMS024)。

分装或使用磁珠时，请适当涡旋震荡或反复颠倒以确保磁珠充分混匀。

磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。

请使用推荐的样本量。如果样本量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响提取获得的mRNA纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善提取效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少总样本量。

由于mRNA容易降解，提取获得的mRNA推荐尽快用于RT-PCR等后续实验。如果不能尽快使用，需要-80℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。