- ￥4600 - 21000
- LMB™
- 中国
- LMB-GC-100/ LMB-GC-500
- 2025年10月10日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
在-20℃可保存12个月，使用时在4℃冰箱缓慢融化，储存于 2-8℃，有效期3个月
- 保质期：
在-20℃可保存12个月: 储存于 2-8℃，有效期3个月
- 英文名：
Gastric cancer organoid medium
- 库存：
10
- 供应商：
朗智生物
- CAS号：
-
- 规格：
100mL/500ml
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥4600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500ml | 产品价格： | ￥21000.0 |
类器官培养基使用说明书
产品信息
| 产品组成 | 规格 | 储存条件及周期 | |
| 1 | 类器官培养基 | 100ml/500ml | 在-20℃可保存12个月，使用时在4℃冰箱缓慢融化，储存于 2-8℃，有效期3个月 |
操作步骤：
1、 原代
- 1.取材后的组织须在 2 - 8℃含有组织保存液的取样瓶中，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。
- 2.准备若干培养皿，加入 4℃预冷的类器官培养缓冲液备用
- 3.取样瓶消毒，将组织放入培养皿中，利用类器官培养缓冲液清洗三次后，利用眼科剪或手术刀将肿瘤组织剪切成体积约为 1~3 mm³ 的组织块。
- 4.组织用原代组织消化液消化，37℃震荡消化10-20 min，（消化过程中随时观察消化情况）。
- 5.取少量液体在显微镜下观察，镜下观察到较多的单个细胞或 70μ m 以下的细胞簇后，加入三倍体积类器官培养缓冲液终止消化。
- 6.使用100μm孔径的筛网进行过滤，将滤液收集后，于300g富集离心5min后移去上清，添加类器官培养缓冲液重新重悬离心。
- 7.基质胶计算：第6步后观察收集到的组织体积，添加25倍组织体积的基质胶重悬铺板。
- 8.24孔细胞培养板为例，每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。
- 9.将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶，添加类器官培养基（恢复室温）进行培养。
- 1.移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液放置2min。
- 2.移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
- 3.1类器官数量不足或体积较小时： 离心5min弃去上清，添加适量肠癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。
- 3.2类器官数量较多或体积较大时：离心5min弃去上清，添加适量类器官传代消化液消化2-3min，添加肠癌类器官缓冲液终止消化，离心5min弃去混合液，添加适量肠癌类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。
- 4.类器官收集后，添加基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min添加500μl肠癌类器官培养基。
3、类器官冻存
- 1.移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官缓冲液放置2min。
- 2.移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）
- 3.离心5min弃去上清，添加适量类器官缓冲液再次重悬，300g离心5min弃去液体。
- 4.添加适量类器官冻存液 ，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例：密度为2个孔冻存1管，每管体积1.4ml。
- 5.做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存。
4、 类器官复苏
- 1.取10ml类器官培养缓冲液于15ml离心管中
- 2.从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。
- 3.水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2 分钟内完全融解。
- 4.将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml 离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g 离心 5分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。
- 5.基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min成胶，添加500μl类器官培养基。
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