巨大芽孢杆菌PCR试剂盒

巨大芽孢杆菌PCR试剂盒
英文名称：Bacillus megaterium
巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）：杆状，末端圆，单个或呈短链排 列。严格好氧 ，能运动，革兰氏阳性。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰/甲基甲醇；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧。工业上用于生产葡萄糖异构 酶，巨大芽孢杆菌在回收贵重金属方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含 磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢杆菌与球形芽孢杆菌混合培养 时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。本产品就是以荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测巨大芽孢杆菌的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 特异性高，引物根据巨大芽孢杆菌高度保守区设计，不会扩增其他微生物。
3. 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照，便于区分假阴性样品。
5. 一管式操作，荧光 PCR 检测，不容易产生环境污染。
6. 本产品只能用于科研，本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

巨大芽孢杆菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	巨大芽孢杆菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	巨大芽孢杆菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 巨大芽孢杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
巨大芽孢杆菌 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（巨大芽孢杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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