禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR试剂盒

禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR试剂盒
英文名称：Reticuloendotheliosis Virus RT-PCR Kit
网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒（Reticuloendotheliosis Virus， REV）引起的一种肿瘤性传染病，病鸡表现为贫血、消瘦，生长缓慢等。病理解剖特点 是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎缩，腺胃炎。本病能侵害机体 的免疫系统，可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本产品就是专门用于 REV 的RT-PCR检测的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。
3. 引物根据 REV 病毒保守的 LTR 序列设计，不与其他病毒发生交叉反应。
4. 使用两步式 RT-PCR，先做 RT 再做 PCR，操作更加灵活。
5. 本试剂盒灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
6. 本试剂盒足够 50 次 20 μL 体系的 RT 反应，50 次 40 μL 体系的 PCR 反应。
7. 本产品只用于科研

禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄 盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
说明书	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的 DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂：样品 RNA

使用方法：

一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 禽网状内皮组织增殖症病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对 照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各 12.5 μL
超纯水		12.5 μL
禽网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
逆转录	42℃	30 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照必须有 135bp 的条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有 预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。


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