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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Vesicular Exanthema of Swine Virus(VESV) SYBR qRT-PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Vesicular Exanthema of Swine Virus(VESV) SYBR qRT-PCR Kit
猪水疱疹病毒(Vesicular Exanthema of Swine Virus，VESV)是一种RNA病毒，是引起水疱疹的病原体。水疱疹是猪的一种高度传染性的急性疾病，其特征是在唇、齿龈、舌、腭、鼻镜及四肢的蹄踵和趾间发生水疱性炎症，临床上很难与口蹄疫、水疱病等疾病区别，因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。
产品特点：
1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。2.根据猪水疱疹病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
猪水疱疹病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 |
2×qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 |
10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL（红盖） |
| 试剂三 |
ROX染料I | 50 μL（棕色管） |
| 试剂四 |
ROX染料II | 50 μL（棕色管） |
| 试剂五 |
荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂六 | 猪水疱疹病毒RT-PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂七 | 猪水疱疹病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL） |
50 μL（黄盖） |
| 试剂八 | 酸释放剂试用装 | 20次（1mL，绿盖） |
| 说明书 | 使用手册 | 1份 |
运输及保存：低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：样品RNA
使用方法：
一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
三、设置RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
| 成分 | N+2 个 样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性 对照（2-7管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
| 猪水疱疹病毒RT-PCR 引物混合物 |
2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
| 样品制备所得RNA模板（来于第8步） | 5.6μL | ||
| 稀释所得6个阳性对照（来于第6步） | 各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） | ||
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
注:需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。
9.上机后按下面参数进行RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| RT（逆转录） | 50℃ | 15-30分钟 |
| 预变性 | 94℃ | 2分钟 |
| RT - PCR反应 （30个循环） |
95℃ | 15 秒 |
| 60℃ | 15 秒（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 15 秒 | |
| 按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
四、数据处理
11.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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文献和实验新型冠状病毒背景介绍与核酸检测整体解决方案分享，从核酸模板制备到 RT 实验策略，再到 qPCR 实验解析与应用。
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