黄热病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

黄热病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称：Yellow Fever Virus(YFV) SYBR qRT-PCR Kit
黄热病病毒(Yellow Fever Virus,YFV)是一种RNA病毒，会引起黄热病，主要通过伊蚊叮咬传播的急性传染病。临床以高热、头痛、黄疸、蛋白尿、相对缓脉和出血等为主要表现。本病在非洲和南美洲的热带和亚热带呈地方性流行，亚洲尚无本病报告。由于黄热病的死亡率高及传染性强，已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一，因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。

产品特点：

1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2.根据黄热病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。

黄热病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	2×qRT-PCR 缓冲液	500 μL（棕色管）
试剂二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（红盖）
试剂三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
试剂四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
试剂五	荧光PCR专用模板稀释液	1mL（亮黄盖）
试剂六	黄热病病毒RT-PCR引物混合液	100 μL（白盖）
试剂七	黄热病病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂八	酸释放剂试用装	20次（1mL，绿盖）
说明书	使用手册	1份

运输及保存：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：样品RNA

使用方法：

一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。

二、样品RNA的制备

三、设置RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

成分	N+2 个 样品管	RT-PCR阴性对照	RT-PCR阳性 对照（2-7管）
2×qRT-PCR 缓冲液	10 μL	10 μL	各10 μL
黄热病病毒RT-PCR 引物混合物	2 μL	2 μL	各2 μL
50×ROX (见注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
样品制备所得RNA模板（来于第8步）	5.6μL
稀释所得6个阳性对照（来于第6步）			各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
10×qRT-PCR酶混合液	2μL	2μL	2μL

注:需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。

9.上机后按下面参数进行RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。

过程	温度	时间
RT（逆转录）	50℃	15-30分钟
预变性	94℃	2分钟
RT - PCR反应 （30个循环）	95℃	15 秒
	60℃	15 秒（采集FAM通道的荧光信号）
	72℃	15 秒
按仪器预设程序进行溶解曲线分析

产品名称	方法	产品规格	价格
黄热病病毒LAMP试剂盒	LAMP	50次	2490
黄热病病毒PCR试剂盒	PCR	50次	1990
黄热病病毒染料法荧光定量PCR试剂盒	染料法	50次	2490
黄热病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒	探针法	50次	2990