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- 2025年08月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Hepatitis E Virus(HEV)
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Hepatitis E Virus(HEV)
戊型肝炎(Hepatitis E )是一种经粪一口传播的急性传染病。HEV 是单股正链 RNA 病毒，呈球形、直径 27~34nm 无囊膜，核衣壳呈二十面体立体对称。戊型 肝炎病毒(HEV)为无包膜的球状颗粒，分为 1~8 共 8 个基因型，中国内地流行株 主要为 1 型(曾称缅甸株)，其次为 4 型。目前尚不能对 HEV 进行细胞培养，可实 验室感染猕猴等多种猴类，HEV 对外界环境抵抗力不强。戊型肝炎传播途径(主要 经粪-口途径传播)和临床表现(隐性感染及急性肝炎，不致慢性肝炎等)与甲型肝炎 相似。戊型肝炎在 15~39 岁的青年和成人高发。戊型肝炎亦为自限性疾病。HEV 对肝细胞亦无直接病变作用(CPE)。机体于病后可获得一定的免疫力，但不够稳固。 目前无戊型肝炎疫苗，预防戊型肝炎采用切断粪-口传播途径为主的措施。本产品 是基于染料法荧光定量 PCR 原理开发，专门检测戊型肝炎病毒的试剂盒。
产品特点：
1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。2.根据戊型肝炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 |
2×qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 |
10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL（红盖） |
| 试剂三 |
ROX染料I | 50 μL（棕色管） |
| 试剂四 |
ROX染料II | 50 μL（棕色管） |
| 试剂五 |
荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂六 | 戊型肝炎病毒RT-PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂七 | 戊型肝炎病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL） |
50 μL（黄盖） |
| 试剂八 | 酸释放剂试用装 | 20次（1mL，绿盖） |
| 说明书 | 使用手册 | 1份 |
运输及保存：低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：样品RNA
使用方法：
一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
三、设置RT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
| 成分 | N+2 个 样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性 对照（2-7管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
| 戊型肝炎病毒RT-PCR 引物混合物 |
2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
| 样品制备所得RNA模板（来于第8步） | 5.6μL | ||
| 稀释所得6个阳性对照（来于第6步） | 各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） | ||
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
注:需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。
9.上机后按下面参数进行RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| RT（逆转录） | 50℃ | 15-30分钟 |
| 预变性 | 94℃ | 2分钟 |
| RT - PCR反应 （30个循环） |
95℃ | 15 秒 |
| 60℃ | 15 秒（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 15 秒 | |
| 按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
四、数据处理
11.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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文献和实验，我们只需先将软件打开，通过主界面的 Template 按钮导入 edt 模板文件即可（图 1，绿色方框），该方法既能节省时间又可以保证实验运行正常。 图 2 双击 edt 模板文件运行实验导致 JAVA 报错实验中断 Part 2：Experiment Properties 的选择 当我们选择新建一个实验时，第一步需要完成 Experiment Properties 的设置。在这里我们为所运行的实验设置实验名，根据实验目的确定实验类型，基于所用荧光标记策略选择荧光定量方法是探针法还是染料法
%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确
