鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)PCR试剂盒

鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)PCR试剂盒
英文名称：Yersinia pestis PCR Kit 
鼠疫耶尔森菌也叫做鼠疫杆菌（Yersinia pestis）是鼠疫的病原菌，鼠疫 是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病，人类鼠疫多为疫鼠的跳蚤叮咬而感 染， 是我国法定的甲类传染病。此菌引起的是啮齿动物中的自然疫源性疾病， 传染性 强，病死率高，易酿成大流行，此菌主要累及皮肤和淋巴结，其次为 败血症、肺炎、脑膜炎，对人体健康有较大危害，因此快速灵敏检测鼠疫耶尔 森菌具有重要意义。本产品就是根据 PCR 原理开发的专门检测鼠疫耶尔森菌 (鼠疫杆菌)的试剂盒。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据鼠疫耶尔森菌 DNA 高度保守区设 计，不会跟除此之外的其它微生物 DNA 发生交叉反应。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 PCR 反应。
6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研。

鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	鼠疫耶尔森菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	鼠疫耶尔森菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL鼠疫耶尔森菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
鼠疫耶尔森菌PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（鼠疫耶尔森菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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