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- 2026年03月25日
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北京赛百盛基因技术有限公司
目录号：MD201
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
核苷酸激酶缓冲液中进行。 质量保证： 无核酸内、外切酶污染。每批T4 DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。 单位定义(粘性末端活性单位）：在20µl连接反应体系、0.12µM (300µg/ml)的5'-末端浓度条件下，16°C反应30分钟，能使50% 的经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个NEB单位。 一个粘端连接活性单位=0.015个韦氏（ATP-PP交换）单位
。如：HindⅢ A↓A G C T TEcoRⅠ G↓A A T T CHpuⅡ C↓C G G2.酶单位数：在最适温度、PH条件下，1小时完全水解1μgλDNA所需的酶量为1个单位。试剂：(1)λDNA（0.38μg/μl）(2)HindⅢ (16u/μl)(3)酶解Buffer(Tris-HCl,NaCl,MgCl2,DTT )(4)反应终止液（溴酚蓝1%，SDS 1%，EDTA 2%，甘油50%）方法：1.取两只EP管充分混匀（1）λDNA 10μl，双蒸水 10μl（2）λDNA 10μl
。 5、在电泳槽中加入1×TAE缓冲液，以高出凝胶表面2mm为宜。 6、取EP管三支，标号，如下表所示准备电泳样品。 1 2 3 样品 λDNA/HindⅢ
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