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文献和实验按照宿主细胞的类型,可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比,哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠,提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能,因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。从最开始以裸露DNA直接转染哺乳动物细胞至今的30余年间,哺乳动物细胞表达系统不仅已成为多种基因工程药物的生产平台,在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中
法和TK基因相比较略显繁琐,需经连续传代,但其不用改造辅助病毒,只需在转移载体中引入Neo基因即可。其它如 PCR、DNA斑点杂交及有限稀释法等,也可用于筛选重组病毒。以上方法各具特点。虽然有些新方法需一定的条件,但一旦建立起来后就可方便、迅速地得到重组病毒,为杆状病毒表达系统的普及应用创造了良好的条件 4、影响外源蛋白表达的因素 利用杆状病毒昆虫表达系统表达外源基因的理论基础,就是杆状病毒的基因表达与调控,但有关病毒晚期基因高表达和其调控机制目前还不十分清楚。利用多角体基因的启动子表达外源
细胞中不起作用,所以这些调控元件大多从启动效率高而且生物背景清楚的病毒基因组中分离。各种启动子效率可用报告基因在细胞中测定。SV40、AdMLP、LTR和CMV启动子在CHO细胞中效果良好。刘文军等比较了SV40、LTR和CMV在ClIO细胞中的表达活性,认为三种启动子的转录活性依次为CMV启动子>SV40启动子>LTR启动子,前者分别是后两者的l0倍和30倍左右。来源于噬菌体的一些启动子,如17启动子也可用于动物细胞。17启动子能被T7RNA聚合酶特异识别,依此建立起来的偶联系统具有常规表达系统不能实现
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