生物素连接酶(BirA)

生物素连接酶(BirA)

包装清单

产品内容	产品编号	包装规格
生物素连接酶	FrdE00020-1	100ug(1mg/ml)
10X Buffer   A	FrdE00020-2	1ml
10X Buffer   B	FrdE00020-3	1ml
D-Biotin	FrdE00020-4	1ml（500uM）

-20℃保存，蓝冰运输

来源：E.coli

1、产品简介

生物素连接酶(Biotin Ligase,BirA)是大肠杆菌BirA基因编码的双功能蛋白质,能识别蛋白质分子的特异性序列(BirA Substrate Peptide),使蛋白质生物素化。该酶带有6his标签，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA去除。

表1.生物素连接酶产品性能。

生物素连接酶	性能
浓度	1mg/ml
酶活	＞7.5kU/mg
最适合酶活pH	8.0-9.0(可操作范围6.0-9.0）
最适酶活温	37°C （温度范围0-37°C）
辅助因子	5-10mM Mg 2+
储存缓冲液	20mM  Tris, 20mM   NaC|， 2mM,Mgcl2,10%Glycerol,pH8.0，
储存温度	﹣20℃，避免反复冻融

2、酶活定义

37°C，pH 8.0反应条件下，将1pmol蛋白质或者多肽（融合BSP序列）生物素化所需要的

的酶量定义为一个活性单位(U)。

3、产品应用

生物素标记融合BSP的蛋白质

4、反应体系

反应物组成	体积	终浓度
生物素连接酶	0.17ul	6.4ng/ul
10X Buffer   A	2.5ul	1X
10X Buffer   B	2.5ul	1X
蛋白（多肽）底物	1nmol	40uM
dH2O	Up to 25ul

总体积25ul，于 30℃孵育 30～40 min 使底物完全生物素化。

5、注意事项

1）本产品的底物为 AviTag 融合蛋白。

2）Buffer A 和 Buffer B 已经针对生物素化反应进行优化，底物浓度不超过 40 µM。如果底物浓度达 40~80 µM，则要加入额外的生物素，反应如下：1 份 10×Buffer A，1 份 10×Buffer B，7 份酶底物混合物和 1 份 D-Biotin。如果底物浓度超过 80 µM，请酌情用 10 mM Tris-HCl, pH 8.0 稀释底物。

3）在相同的酶量下，高浓度的底物（高至 40 µM）可以保证快速完成生物素化，底物浓度越低，生物素化所需时间越长。使 用相同量的生物素连接酶，40 µM 底物可以在 30 分钟内完成生物素化，而 4 µM 底物则需要 5 小时。如果需要在 30 min 内使 4 µM 底物完成生物素化，相同的底物量应加入 10 倍量的酶。

4）如底物蛋白（多肽）需保存在较低温度时，可适当降低反应温度并应延长酶促反应时间。

5）氯化钠（>100 mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50 mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。

6）底物中可含有 Tris(pH 8.0)， 最佳浓度为 10 mM，不超过 50 mM。

 

*本试剂仅供实验室研究使用