共聚焦培养皿763520

丁香园论坛关于显微镜问题汇总（一）

：如果你将用的confocal microscope是载物台运动扫描（镜头在底下），则细胞必须是贴壁很牢的；如果是激光束运动扫描方式，则只要细胞能够沉淀在培养皿底部即可。注意培养皿底部要是很薄的玻璃片形式的。新手小猪：共聚焦显微镜可以让你清楚地看到细胞各个层面，所以有利于细胞内蛋白质以及细胞器的定位（当然，这些必须是经过标记你才能看到）。victor2002：观察普通免疫荧光（FIAT）的荧光显微镜可不可以用来观察细胞自发荧光吗？我用pEGFP质粒转染HepG2细胞，不知可不可以用观察普通免疫荧光的荧光显微镜观察？还是必须

激光共聚焦实验服务案例介绍

')2 Fragment(Invitrogen) 上述试剂均由嘉美生物代买。 实验仪器：激光共聚焦扫描显微镜(LeicaTCS-SP5型) 实验步骤： 将细胞每孔2ml（密度为2*106/L）传至激光共聚焦专用培养皿；接种24h后，采用刺激物处理；25min后培养皿内细胞培养液，PBS冲洗3次，2-4%甲醛固定15min；1×PBS缓冲液（0.01M，pH7.4）洗涤3次，每次5min，滴加非免疫山羊血清（内含0.3%Triton X-100）封闭液,覆盖液面2-3mm，室温放置60min，除去

丁香园论坛关于显微镜问题汇总（三）

在细胞本身。　　顺便问一句，你是在什么装置内培养细胞的？据我所知，一般培养瓶是很难在共聚焦载物台上进行操作的。 roosterjian：建议你将盖玻片铺在培养皿内，贴壁后实施预刺激等，加入染料待细胞摄取，然后取出来，固定，观察。另外，共聚焦的镜头通常是短工作距离的（小于1mm，为提高分辨率），要是在培养皿里观察必须用特殊的培养皿，厚度和盖玻片一样必须满足镜头的工作距离。我通常是先用长工作焦距的落射荧光镜观察，然后铺片上共聚焦。