- 询价
- 天净沙
- 211216-100
- 天净沙
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
北京天净沙基因科技有限公司，是一家聚焦科研试剂、动物检验检疫、分子诊断的研发和生产企业。自创建以来，公司秉承“因为全在心上，所以不在话下”的经营理念，坚持把核心技术放在心上、把产品质量放在心上、把用户服务放在心上的三项原则，让所有困难都不在话下。
我们北京诺博莱德科技有限公司作为天净沙公司的特约经销商为客户提供，保证原装正品，货期稳定，折扣好的服务标准。
天净沙211216-100可调式易错 PCR 试剂盒，产品简介：
产品品牌：天净沙
产品名称：可调式易错 PCR 试剂盒
产品货号：211216-100
产品规格：100次
天净沙211216-100可调式易错 PCR 试剂盒
产品及特点
易错PCR（Error-prone PCR）是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。本产品是在本公司的易错PCR试剂盒的基础上改进而得，本
产品具有下列特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮PCR的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。
3. 可用于连续易错PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
4. 可以扩增的DNA片段更长，达到2kb，对于2kb以上的产物，建议分段扩增。
5. 本试剂盒足够100次30uL体系的易错PCR。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品采用五孔盒包装
| 成份 | 编号 | 规格 | 包装材料 |
| 可调易错PCR专用 Taq DNA聚合酶（5U/uL） | 101005c | 50 uL | 0.5mL红盖管 |
| 5×可调易错PCR Mix（含dNTP | 211216a | 600 uL | 0.5mL黄盖管 |
| 可调易错PCR专用MnCl2 | 211216c | 300 uL | 0.5mL紫盖管 |
| 可调易错PCR专用dGTP | 211216d | 300 uL | 0.5mL蓝盖管 |
| 10×可调易错PCR追加dNTP | 211216e | 300 uL | 0.5mL本色管 |
| 使用手册 | 211216sc | 1份 | 无 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存, 有效期为一年
自备试剂
引物、DNA模板、常规PCR试剂盒
使用方法
1. 将引物稀释到10uM。引物也是决定易错PCR成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm在70℃，长度在25-30nt之间，GC含量在45%-60%之间，3端GC含量低，并且没有发夹结构。
2. 用自备易错PCR引物和自备的常规PCR试剂扩增制备易错DNA模板（常规PCR产物），胶回收并准确确定浓度。注意：易错PCR的模板一定要用胶回收的常规PCR产物，因为胶回收会可以把电泳不可见的非特异性扩增片段去除，否则这些片段由于也是用易错PCR引物扩增所得，在易错PCR扩增时也会被扩增，产生竞争抑制，降低靶分子的扩增效率。
3. 将回收的DNA片段（模板）稀释到1ng/uL 、10ng/uL和100ng/uL三个浓度。注意：模板使用量是影响突变率的最重要因素，模板DNA为非突变DNA，扩增产生的DNA为突变DNA，易错PCR体系最终DNA量是基本固定的，因此模板DNA使用量越大，则突变DNA在终产物中的相对比例就越低，突变率就越低。故建议同时测试三个模板用量。如果都成功，则优先选用模板浓度低的PCR产物进行分析。
4. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定30uL易错PCR体系中MnCl2和dGTP的用量（这是在模板DNA不超过1ng的前提下的数据）。表中的Mn表示可调易错PCR专用的MnCl2, dG表示可调易错PCR专用的dGTP：
| 预期突变数 | 2个 | 3个 | 4个 | 5个 | 6个 | 7个 | 8个 |
| Mn用量（uL） | 0 | 1.0 | 2.5 | 4.0 | 4.0 | 4.0 | 4.0 |
| dG用量（uL） | 0 | 0 | 0 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
5. 设置30uL体系的可调易错PCR：第一次建议设置3个模板浓度。在3干净的PCR管中，分别加入下列成分。最后加可调易错PCR专用MnCl2
| 成分 | 模板用量1 | 模板用量2 | 模板用量3 |
| 可调易错PCR Mix, 5× | 6 uL | 6 uL | 6 uL |
| 可调易错PCR 专用dGTP | 根据上步用量表表选择 | 根据上步用量表表选择 | 根据上步用量表表选择 |
| 自备DNA模板 | 1 uL （1ng/uL） | 1 uL （1ng/uL） | 1 uL （1ng/uL） |
| 自备PCR引物 (10 uM each) | 1 uL each | 1 uL each | 1 uL each |
| 可调易错PCR专用 Taq DNA聚合酶 | 0.5 uL | 0.5 uL | 0.5 uL |
| 可调易错PCR 专用MnCl2 | 根据上步用量表表选择 | 根据上步用量表表选择 | 根据上步用量表表选择 |
| 自备超纯水 | 补水到30uL | 补水到30uL | 补水到30uL |
6. 按已经优化的常规PCR条件进行易错PCR：
| PCR前变性 | 94℃ 3分钟 |
| 易错PCR(循环30-60次 | 94℃ 1分钟 |
| 60℃ 1分钟 | |
| 72℃ 3-10分钟 |
7. 易错PCR结束后，取3uL进行电泳检查。
8. 如果有预期大小的PCR产物，则全部电泳，进行胶回收，再进行克隆和测序等后续操作。如果需要增加突变率，可以选择一个突变后的DNA为模板，再进行下一轮易错PCR。
9. 如果没有预期大小的PCR产物，可以按下列操作追加进行一轮常规PCR（追加PCR）。
10. 在PCR管中，加入3uL 10×可调易错PCR专用追加dNTP到27uL电泳剩下的PCR体系中，按下表进行追加PCR（chasing PCR）。注意追加PCR只做20次循环。
| 步骤 | 参数 | 循环数 |
| 追加PCR | 94℃ 1分钟 | 循环20次 |
| 60℃ 1分钟 | ||
| 72℃ 1分钟 |
11. 追加PCR结束后，再电泳检测。如果有条带，再进行克隆和测序等后续操作。如果需要增加突变率，可以选择一个突变后的DNA为模板，再进行下一轮易错PCR。
12. 如果没有预期大小的PCR产物，则需要分析原因
疑难解答
Q：现象：没有PCR产物。
A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不纯，最好先胶回收；四是DNA溶液中有EDTA，可以适当补加Mg++。
Q：现象：太多的PCR条带或PCR条带模糊一片。
A：可能原因：一是模板有胶回收、二是PCR循环数太多；三是复性温度太低；四是引物没有优化；五是PCR条件没优化，可以使用touch-down PCR。
Q: 如果需要更高的突变率，如何办？
A: 可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收易错PCR片段,再用于下一轮易错PCR。
关联产品
易错PCR试剂盒
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验buffer，摸索镁离子浓度或适当加入 DMSO（小于 0.3%） · 提高退火温度，增加延伸时间（反应条件参照试剂盒说明书） 问题 2：假阳性 现象：空白对照出现条带 可能原因： · 引物设计不适，与目的序列具有同源性 · 试剂污染：水、移液枪等被核酸污染 · 样品间出现交叉污染 解决方法： · 实验仪器高压灭菌 · 实验试剂（酶除外）高压灭菌，离心管枪头一次性使用 · 规范实验操作 · 假阳性可通过巢式 PCR 解决，或者使用特异性较高的试剂盒扩增 问题 3：拖尾、弥散 现象：电泳出现拖尾、涂抹
PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增（左图）与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增（右图）。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液，您只需添加模板和引物，然后，开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤，使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样（注意：确保染料与下游应用兼容）。直接
过的 DNA 聚合酶增强了与模板的亲和度，其灵敏度更高，因而所需的模板量少。过低的模板量会减少 PCR 的产量，过高的模板量可能造成非特异性扩增，所以 DNA 模板量的优化尤为重要。 除了 gDNA、cDNA 和质粒 DNA，PCR 产物也可作为模板以获得更高的产量。但 PCR 产物中存在的残余反应组分（如引物、dNTP、盐和副产物）可能会影响下一次的 PCR 反应。所以推荐在下一次 PCR 前使用 PCR 产物纯化试剂盒将 PCR 产物先进行纯化。 【DNA 聚合酶】 DNA 聚合酶是PCR扩增中最关键
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
