生殖细胞瘤，48例，96芯 （1.5mm）

MTT 的操作方法（三）

浓度药物的培养基，这样能保证药物浓度的准确。另外，需注意的是，如果用这种方法，不要把 96 孔板的培养液全部吸走后再加药，应该吸完一部分后立即加样，避免由于 96 孔板干燥引起细胞死亡。4. 5%CO2，37℃ 孵育 16-48 小时，倒置显微镜下观察药物的作用效果。下图为一典型的药物梯度为细胞的毒性作用。5. 每孔加入 10ulMTT 溶液（5 mg/ml，即 0.5%MTT），继续培养 4 h。若药物与 MTT 能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用 PBS 冲 2-3 遍后，再加入含 MTT

CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导

4 - 6 h。6. 转化（Amp+），挑克隆，摇菌，抽提质粒，测序！7. 转染24 孔板，细胞不要过满，同实验室日常转染操作，可选择性设置三个平行。同时转染空载作为阴性对照。每孔 500 ng。8. puromycin 筛选转染稳定 48 - 72 h 后加 puromycin 进行筛选，1～3g/mL，直至不再有细胞数量稳定，不再有细胞因不耐药死去。9. 单细胞分离由于篇幅原因，有限稀释法具体细节会在后面的文章单独讲解，请关注科研小助手后续文章。100 个细胞铺在一个大盘或 96 孔板中。剩余的细胞

　秩和检验

）≠F（X 2 ）。本法由于部份地考虑了数据的大小，故检验效力较符号检验大大提高。至于其方法、步骤，不论是查表法或计算法、也都相当简便，现举例说明如下。 一、成对资料的比较 此法由Wilcoxon氏首次提出，故又称Wilcoxon氏法。 处理时可用查表法或计算法，今以例10.3分别说明如下。 查表法步骤： 1．排队，将差数按绝对值从小至大排列并标明原来的正负号，见表10.3第（5）栏，排队后与原豚鼠号已无对应关系。