- ￥1190
- YLKBIO
- YLK-T0010
- 国产
- 2025年12月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
666
- 英文名：
Column Viral DNA-RNAOUT
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
常温
- 规格：
50次
中文名称：柱式病毒RNA-DNA双提试剂盒
英文名称：Column Viral DNA-RNAOUT
产品规格：50次
产品货期：现货
产品运输：常温运输
产品介绍：柱式法同时提取病毒DNA和RNA
产品及特点：
本产品是在柱式病毒 DNAOUT 的基础上开发的、专门用于从血清(血浆) 等液体样品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等）中提取微量病毒 DNA 和 RNA 的产品。
它具有下列特点：
1. 本产品可用于病毒 RNA、病毒 DNA 提取以及 DNA 和 RNA 双提取。
2. 操作简单，整个过程只需要 20 分钟左右。
3. 灵敏度高，通过 PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 30-50 拷贝/mL。
4. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5. 与 PCR 和荧光 PCR 兼容。所得 DNA 可用于 PCR、酶切等实验；RNA 可用于 RT-PCR 和 Northern 杂交等实验。
6. 价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
7. 适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无 细胞材料。
规格及成分：
| 成份 | 大扁盒包装 |
| 柱式病毒 DNA-RNA 双提取溶液 A | 30 mL |
| 上柱结合液 | 40 mL |
| 离心吸附柱 | 50 套 |
| 通用洗柱液 | 50 mL |
| RNA 洗脱液 | 10 mL |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：无，但需要自备 RNase-free 的 1.5 mL 离心管（耗材）。
本产品仅供科研
使用方法：
1. 对于液体病毒样品：在 1.5 mL 离心管中加入 0.1-0.2 mL 液体病毒样品。如 果病毒需要富集，可以将 1.5 mL 液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟，移 弃1.3 mL 后剩下的 0.2 mL 用于第 2 步处理。 对于拭子样品：将一个拭子放入离心管中，加入 1mL 自备的生理盐水，振荡器 上充分振荡半分钟后转移 0.2 mL 到 1.5 mL 塑料离心管中，用于第 2 步处理。
2. 加入 0.6 mL 溶液 A 到第一步得到的 0.2 mL 样品中，振荡 30 秒混匀后室温 放置 10 分钟。注意：溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL） 到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。
4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集 上柱结合液 40 mL 编号 130971a 130971b 130971sc 60911 71207 60408 管中。
5. 将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤 3 的离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。
6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收 集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃 收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
9. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 RNase-free 的 1.5 mL 离心管中，在 离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 μL 洗脱液，然后室温放置 2 分钟。
10. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，离心管中的溶液即为病毒 DNA 和 RNA 溶液。
11. 所得溶液可以直接用于 PCR、RT-PCR 等实验，也可放-20℃长期保存备用。
疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存，每个病毒最多 只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子，每种 RNA 有很多拷贝)，同时 其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很 多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作 中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测 OD 检 测，只能通过 PCR 或 RT-PCR 检测，而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。
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文献和实验，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 回收 回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度 DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉淀法步骤如下，把切得的胶弄碎，用 Tris-HCl 浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，沉淀
过夜，其实完全没有必要，我一般酶切3个小时，其实1个小时已经足够。应用大体系，如100微升。纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，我推荐柱式，因为割胶手法不准，很容易割下大块的胶，影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物，既然如此，酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以，PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒酶量的问题：以TAKARA的为例，其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义
，因为割胶手法不准，很容易割下大块的胶，影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物，既然如此，酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以，PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒。 酶量的问题：以TAKARA的为例，其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。 而该酶浓度约为15单位/微升，在除外酶降解的 因素外，该酶可分解15 μg的DNA，而一般从1-4 ml菌液提出
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