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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
65
- 英文名:
/
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样
微量法100T/96S
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
锌是必需的微量元素之一,在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。
测定原理:
在pH 8.5~9.5的溶液中,Zn2+与锌试剂生成蓝色配位化合物,在620nm有最大吸收峰。
自备仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水和无水乙醇。
试剂组成和配制:
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前1天配制,加入15mL无水乙醇充分溶解,盖紧,过夜待用。4℃保存可稳定约1个月,如颜色变黄,则已失效。
标准液:液体×1支,10 μ mol/L Zn2+标准液。4℃保存。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到620 nm,蒸馏水调零。
2. 标准液解冻:提前取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。
3. 空白管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL蒸馏水,100μL试剂一,混匀;室温,13000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL标准液,100 μL试剂一,混匀;室温,13000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A标准管。
5. 测定管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL血清,200 μL试剂一,混匀;室温,8000g,离心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL试剂二,100μL试剂三,充分混匀后13000g离心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
血锌浓度计算公式:
血锌浓度(μ mol/ L)=C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
= 10×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
C标准液:10 μ mol/L Zn2+
注意事项:
- 试剂三需提前一天配制,如变黄色则不能再使用。
- 加入试剂三混匀后,要在30 min内完成该管测定。
- 最低检出限为1μ mol/L。
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
bin1986 最近在做凋亡,在用凯基的caspase-3分光光度法试剂盒检测 细胞经过与药物孵育24小时后检测 用酶标仪检测,OD值在0.1-0.3之间,有一定浓度依赖,高浓度下caspase-3的活化程度有差不多4 问题在于,我用BCA蛋白定量得到的蛋白浓度时30多ug/ul,我加了有250ug,如果按照说明书的话,这个OD值应该在1左右,而我的最高才0.3.另外我的control孔(没加药)与我最低浓度
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
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