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赖氨酸(lysine,Lys)
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50
lysine,Lys
/
1年
上海烜雅生物科技有限公司
2-8℃
100管/96样
赖氨酸(lysine,Lys)含量测定试剂盒说明书
微量法100管/96样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:赖氨酸是人体必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。测定原理:蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2,它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质,其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同,而且仅有—个游离氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。试剂的组成和配制:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入12.5mL试剂三充分溶解混匀;试剂二:液体12.5mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存;试剂四:60%乙醇,自备。赖氨酸提取:样本烘干粉碎,称取约0.01g样本,加入1mL提取液,充分匀浆。80℃水浴提取20min,冷却后10000g离心10min,取上清待测。测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
工作液的配制:取10mL试剂一与10mL试剂二混合摇匀,取上清备用。用不完的试剂4℃保存。
在有盖EP管中加入下列试剂:
试剂名称(μL)
测定管
空白管
样本
100
提取液
工作液
200
混匀,80℃水浴30min(盖紧,以防止水分散失),冷却至常温。
试剂四
300
混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,于530nm波长处记录吸光值A。△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。赖氨酸含量计算:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y = 0.0062x - 0.0212;x为赖氨酸含量(µg/mL),y为吸光值。1.按照蛋白浓度计算赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr2.按照样本质量计算赖氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515=185.73×(△A+0.0212) ÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定回归方程为y = 0.0031x - 0.0212;x为赖氨酸含量(µg/mL),y为吸光值。1.按照蛋白浓度计算赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr2.按照样本质量计算赖氨酸含量(µg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515=371.45×(△A+0.0212) ÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。
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71 人阅读发布时间:2023-03-09 14:04
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