MC3T3-E1Subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14细胞介绍
从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。 从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。 MC3T3亚克隆4(ATCC CRL-2593)和MC3T3亚克隆14(ATCC CRL-2594)在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。 它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。 MC3T3亚克隆24(ATCC CRL-2595)和MC3T3亚克隆30(ATCC CRL-2596)在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。 不形成ECM, 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。 矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA,及唾液酸糖蛋白(BSP),骨钙素(OCN),和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。 高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质,表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1,一种成骨细胞相关转录因子。 植入免疫缺陷小鼠以后,高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨,低分化细胞只是产生纤维组织。 这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型,尤其是ECM信号。 它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。
MC3T3-E1Subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14细胞特性
1) 来源:小鼠 颅顶骨
2) 形态:成纤维细胞,贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
MC3T3-E1Subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
MC3T3-E1Subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14培养基及培养冻存条件准备:
1)准备MEMα基础培养基 89%
优质胎牛血清 10%
NaHCO3 1.5g/L
肌醇 43.2mg/L
叶酸 8.82mg/L
β-巯基乙醇 7.8mg/L
P/S青霉素-链霉素 1%
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
MC3T3-E1Subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
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