- ￥950
- 南京万木春
- 可根据客户要求调整
- 进口/国产
- WM-YX13232
- 2025年11月19日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
南京万木春生物
- 检测范围：
可根据客户要求调整
- 检测方法：
竞争法/夹心法
- 应用：
仅供科研，不得用于临床
- 适应物种：
标题物种
- 标记物：
HRP
- 样本：
血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆
- 规格：
48T/96T
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被颗粒酶B（Gzms-B）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的颗粒酶B（Gzms-B）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
- 酶标仪（450nm）
- 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
- 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
- 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16 pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
- 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
- 灵敏度：最低检测浓度小于0.1pg/mL。
- 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
- 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
- 有效期：6个月
南京万木春生物简介
南京万木春生物ELISA试剂盒，可提供免费代测啦！
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文献和实验【信息】Rabbit anti-GAPDH(SF-PA005)（兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体）招代理
GAPDH多克隆IgG抗体源自重组人GAPDH蛋白 C 端片段免疫新西兰大白兔。 特异性 兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体推荐用于人、 大鼠、小鼠及其它哺乳动物 GAPDH 蛋白检测，特异性?选?/p> 纯化 分离抗血清并亲和层析纯化。 应用 免疫组化 1:100-1:400 免疫荧光 1:100-1:400 Western Blot 1:400-1:800 ELISA 1:2,000-1:8,000 最优稀释比例依不同实验具体情况而定。 保存
性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量检测中做出了巨大贡献，但同时它也有着明显的缺陷： 1，兔多抗对cAMP，cGMP的特异性不高，会与其他核苷类似分子发生交叉
用于免疫检测的特殊配方的抗体稀释液，可以促进抗原抗体特异性结合，产生比传统方法高几倍或十几倍的信号强度，从而解决免疫检测实验中（比如免疫印迹，ELISA等）经常遇到的低灵敏度和高背景强度等问题，得到准确清晰的实验结果。 试剂盒操作简单方便，含有溶液1和2两种即用型溶液，分别用做一抗和二抗的稀释液，替代其他的传统稀释缓冲液，包括TBS，TBST，PBS，PBST等。其余操作均按照标准的免疫检测操作流程进行。此外，试剂盒中各组分对标记抗体的酶活性（辣根过氧化物酶HRP，碱性磷酸酶AP等）均没有影响
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