甲磺酸乙酯 (CAS#62-50-0)

5 分钟学会 cas9 基因敲除——原来设计方案如此简单

CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA

诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？

精度 ≥ 50%。 为了减少 CRISPR-Cas 核酸酶因意外结合切割而产生的脱靶效应，目前通过使用高保真 CAS 变体和合理设计去氨基酸结合结构，以减少不依赖 Cas 的核酸结合。同时，使用新方法将 CAS 编辑器递送到目标位点并优化现有编辑器可以同时尽量减少脱靶效应。 此外，将碱基编辑器融合到 Gam(来源于噬菌体 Mu 蛋白，可以结合在 DNA 双链断裂的末端，保护 DNA 不被降解) 可以最大限度地减少碱基编辑过程中的 indel（插入缺失）形成。 编辑精度面临着更

北大伊成器团队 Nature Method 发文，揭示单碱基编辑脱靶风险！

后，相应的测序信号都出现了极大的降低。这些结果都表明了 CBE 脱靶效应的存在。 作者对脱靶现象进行了进一步细分，发现这些脱靶现象发生的靶点可以被分为 Cas9 依赖性以及 Cas9 非依赖型。 图片来源：Nature Method 为了验证 Detect-seq 的可靠性，作用将 Detect-seq 与此前被用来研究 Cas9 依赖型脱靶效应的工具进行了对比。与 GUIDE-seq 相比，Detect-seq 识别出了大部分 GUIDE-seq 在 EMX1 与 VEGFA_site_2 中识别