间充质干细胞专用冻存液-20

间充质干细胞专用冻存液
1.  产品信息

2.  产品特性
    本产品由本公司干细胞科研团队根据间充质干细胞长期低温冻存需要，经过多年的实验研究、不断的工艺优化改造而设计。
    本产品能够有效提高冻存细胞存活率，细胞活率达到 85%以上，不影响细胞的增殖特性和诱导分化能力。
    严格控制产品质量和安全性，无细菌、真菌、内毒素及支原体污染，确保冻存细胞的安全。
    本产品适用于各类间充质干细胞。
3.  质量控制

4.  产品保存
    产品保存温度为 2-8℃，保质期为 1 年；
    产品请于保质期内使用，超过保质期，请勿使用，按照医疗垃圾处理；
    为保证产品质量，请勿反复冻融。
5.  注意事项
    在无菌条件下处理该产品；
    为保证冻存效果，建议使用本公司专用的间充质干细胞培养基配套试剂
     该产品仅限科研使用。
6.  产品使用
1) 细胞冻存
   提前将干细胞专用培养基、  PBS、0.25%胰蛋白酶溶液放置于 37℃环境预热；    选择处于对数生长期的细胞， 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基；    用 PBS 清洗细胞 2 次，注意操作轻柔，不要损伤贴壁细胞；
   加入 0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA 溶液浸润整个皿底， 37℃培养箱中孵育2min；
注意：加入胰蛋白酶的量以刚好覆盖细胞为宜，T-25 培养瓶推荐加入 1ml 胰蛋白酶， 10cm 培养皿推荐加入 2ml 胰蛋白酶
   显微镜下观察消化情况，当 80%细胞皱缩、变圆时，加入和胰蛋白酶相同体积的血清或
3 倍体积的干细胞专用培养基终止消化；
   用移液管吸取溶液，轻柔吹打底部 ，直至全部细胞脱落后收集至离心管中，充分混匀后
吸取适量细胞悬液进行细胞计数和活率检测，离心管置于离心机内，500g 离心 5min。
   离心结束后，弃上清，从冰箱中取出 hMSC 专用冻存液，根据细胞计数结果用 hMSC
专用冻存液重悬细胞，轻柔吹打混匀后分装至冻存管/袋中；为保证冻存效果，推荐间充 质干细胞冻存密度为 0.5×106 -5.0×106/ml；
   冻存管上标识好细胞信息，立即放置于程序降温盒中并转移至-80℃冰箱中暂存；24h
后转移至液氮中长期保存。
2) 细胞复苏
    开启水浴锅预热至 37℃， 干细胞专用培养基提前预热至 25℃左右；     无菌条件下 ，吸取专用培养基加入到离心管中备用；
    从低温容器中取出冻存管，立即置于水浴中来回迅速摇晃，直至冻存液完全解冻，此过
程控制在 2min以内；
注意：
①  尽可能避免水没过冻存管帽，建议用镊子夹住冻存管连续晃动，以降低污染的风险
②  2min 内务必完成细胞复苏过程，时间过久会导致复苏细胞活率较差，无法贴壁
    待细胞冻存液完全解冻 ，用 75%酒精擦拭冻存管的外壁后拿入超净台内；
    无菌条件下，迅速将细胞悬液转移至含有专用培养基的离心管中，用移液管轻柔吹打混
匀细胞后接种至培养瓶中或培养皿中，接种密度控制在(0.7-1.0) ×104 个细胞/cm2；
注意：
①  由于刚复苏的细胞比较脆弱，请勿离心处理，整个操作过程保持轻柔
②  为了保证复苏培养效果， 推荐使用 Corning 等国际一线品牌的培养瓶/皿
    将培养瓶/皿置于平面上，轻柔上下左右十字摇晃 5 次，使细胞悬液均匀分布于培养瓶/
皿中；
    在培养瓶/皿上方标识好细胞信息 ，转移至 5%CO2、37℃、  湿度为 95%的二氧化碳培
养箱中培养；
注意：为了保证贴壁效果，2h 请勿移动培养瓶/皿
    24h 后进行全量换液处理，之后每隔 2 天换液一次；当细胞汇合度达到 80-90%时，进
行传代处理。