人胃癌成纤维细胞 丨逸漠(immocell)

人胃癌成纤维细胞

产品基本信息

细胞名称：人胃癌成纤维细胞

种属来源：人

形态特征：成纤维细胞样

生长特性：贴壁生长

组织来源：胃

培养基:：专用培养基

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

2)传代方法

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次;

2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化;

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;

4.待细胞完全贴壁后，培养观察;之后每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。

3)细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。