线粒体苹果酸脱氢酶（MDHm）测试盒

中文名称：线粒体苹果酸脱氢酶（MDHm）测试盒
货号：YLK0256
测试方法：微量法、紫外分光光度法
产品规格：100管/96样、50管/48样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义： MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果 酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生 理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧 代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH，细菌中通常只含有 NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体 中。

测定原理： MDHm 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。

需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和 蒸馏水。
 

本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
 

样本测定的准备： 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器 或研钵匀浆。
2、 将匀浆液于 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 MDH（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于 MDHm 活性测定。
 

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