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- 保存条件:
常温
- 保质期:
90天
- 英文名:
pLV3-CMV-MCS
- 库存:
50
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1380.0 |
温州科淼生物科技有限公司(Whenzhou KeMiao Biological Technology Co.,Ltd)是一家专业从事“产品研发生产,市场销售,技术服务”为一体的高科技生物技术公司,致力于为科研实验服务,,主要产品为抗体、elisa试剂盒、质粒、重组蛋白、生化试剂等其他相关试剂。
科淼生物拥有数万种质粒,还提供基因合成、质粒改造、载体构建和蛋白表达等精品实验服务,详情请联系客服!!!
1.载体(Vector)的概念
这种运载工具就叫做载体(vector)。
基因工程上所用的载体是一类能自我复制的 DNA 分子,其中的一段 DNA 被切除而不影响其复制,可用以置换或插入
外源(目的) DNA 而将目的 DNA 带入宿主细胞。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等。
载体的功能及特征:
运送外源基因高效转入受体细胞
为外源基因提供复制能力或整合能力
为外源基因的扩增或表达提供必要的条件
载体应具备的条件:
具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点
具有较高的外源 DNA 的载装能力
具有多具有合适的筛选标记
种单一的核酸内切酶识别切割位点
2.质粒(Plasmid)的概念
质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。质粒常见于原核细菌和真
菌中,绝大多数的质粒是 DNA 型的,少部分为 RNA 型。天然 DNA 质粒大都具有共价、封闭、环状的分子结构,其分
子量范围:1-300 kb。细菌质粒是基因工程中最常用的载体。
质粒的基本特征:
质粒的自主复制性:质粒能利用寄主细胞的 DNA 复制系统进行自主复制,其 DNA 上的复制子结构决定了质粒与寄主
的对应关系,并根据在每个细胞中的分子数(拷贝数)多寡,质粒可分为两大复制类型:
严紧型复制控制的质粒 1 - 3 拷贝
松弛型复制控制的质粒 10 - 60 拷贝
质粒的不相容性:任何两种含有相似复制子结构的不同质粒,不能同时存在于一个细胞中,这种现象称为质粒的不相容
性,不相容性的质粒组成不相容性群。以大肠杆菌的质粒为例:
ColE1、pMB1 拥有相似的复制子结构,彼此不相容。
pSC101、F、RP4 拥有相似的复制子结构,彼此不相容。
p15A 及其衍生质粒拥有相似的复制子结构,彼此不相容。
质粒的可转移性:革兰氏阴性菌的质粒可分成两大类:
接合型质粒——能在天然条件下自发地从一个细胞转移到另一个细胞(接合作用),如 F、Col、R 质粒等。
非接合型质粒——不能在天然条件下独立地发生接合作用如 Col、R 的其它成员。
值得注意的是,某些非接合型质粒(ColE1)在接合型质粒的存在和协助下,也能发生 DNA 转移,这个过程由 bom 和
mob 基因决定
携带特殊的遗传标记:野生型的质粒 DNA 上往往携带一个或多个遗传标记基因,这使得寄主生物产生正常生长非必需
的附加性状,包括:
物质抗性:抗生素、重金属离子、毒性阴离子、有机物等。
物质合成:抗生素、细菌毒素、有机碱等。
这些标记基因对 DNA 重组分子的筛选具有重要意义
3.质粒载体的分类
天然存在的野生型质粒由于分子量大、拷贝数低、单一酶切位点少、遗传标记不理想等缺陷,不能满足克隆载体的要求,因此往往需要以多种野生型质粒为基础进行人工构建。
质粒载体按功能分:
克隆载体—都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增 DNA 片段(基因)的载体。
表达载体—具有克隆载体的基本元件(ori,Ampr,Mcs 等)还具有转录/翻译所必需的 DNA 顺序的载体。
质粒载体按进入受体细胞类型分:
原核载体
真核载体
穿梭载体(sbuttle vector)指在两种宿主生物体内复制的载体分子,因而可以运载目的基因(穿梭往返两种生物之间)。穿梭质粒含原核和真核生物 2 个复制子,以确保两类细胞中都能扩增。
科淼生物的各种产品发货前经经过严格的多重验证,收到质粒后请短暂离心,加入20ul ddH2O溶解质粒,取2ul转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用,需要质粒图谱或测序 报告可联系客服获取!!!
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文献和实验也可以,这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白,而不是融合蛋白。 liuyicheng84427 VEGF应该加在GFP的N端还是C端? lmnsmu VEGF加在GFP的N端或C端均可以,而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列,只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。 naj2007 多谢大家! hiqihong
Recombinant DNA Engineering, Or Cloning Genes In Plasmids
have a promoter upstream of the MCS such that the insert gets transcribed. If the promoter is mammalian (e.g., the CMV promoter), the transcription will take place only in mammalian systems (like mammalian cell culture), but not in the bacteria. Plasmids
型启动子(CMV、Ubi等)终止转录的情况。载体系统也分多种,包括慢病毒载体、腺病毒载体、质粒载体等。瞬时过表达方式主要是经过人工化学修饰的运用化学方法合成的双链RNA,能模拟细胞中内源性成熟miRNA的高水平表达,以增强内源性miRNA的调控作用,进行功能获得性研究。只需直接转染进入细胞,即可检测功能变化,快速,方便。miRNA靶位点鉴定:目前最为常用的miRNA靶位点鉴定方法是荧光素酶报告基因法。其基本原理是首先构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3′UTR构建到荧
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