线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒（紫外分光光

中文名称：线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒（紫外分光光度法）
货号：YLK0112
测试方法：紫外分光光度法
产品规格：25管/24样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、 微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ，同时可使 O2还原生成 O 2.-，是呼吸电子传递链上产生 O 2.-的主要部位。 测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS） 生成状态。

测定原理
复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶 活性的大小。

本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
 

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸 馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：0.5 mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂四：25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂五：1 mL×1 支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 2mL 蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。 工作液的配制：临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。


样本的前处理： 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰 浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选 做）。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。

测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5min。
（2）在 1mL 石英比色皿中加入 40μL 样本、800μL 工作液和 60μL 试剂六，立即混匀， 记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

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