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100
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1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/48样
中文名称:NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒(紫外分光光度法)
货号:YLK0108
测试方法:紫外分光光度法
产品规格:50管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
NAD-MDH 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。
测定原理
LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙-酮酸,丙-酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基-苯-肼作用生成丙-酮酸二 硝-基-苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙-酮酸浓度成正比。
本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一、提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;
试剂二、液体 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;
试剂三、粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μL 蒸馏水,充分溶解待用,用不完的试剂 分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四、粉剂×2 支,-20℃保存;临用前加入 300μL 蒸馏水,充分溶解待用,用不完的试剂 分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本测定的准备:
样本测定的准备: 1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量 (104个):试剂一体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。


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文献和实验度。 (2) 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,应注意仪器的校正和检定。 (3) 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,影响精度的因素较多,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次,得到吸光度的相对标准偏差。表1 精密度测定结果 2.3 稳定性 取1mg/ml牛 血清 蛋白标准溶液每十分钟测定一次,50分钟内的吸光度变化如下表2。表2 稳定度测定结果 3. 结论该方法测定快速、简便,干扰物少,是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。
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