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现货
- 英文名:
Hieff Trans® mRNA Transfection Reagent Hieff Trans
- 保质期:
一年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
2-8ºC
- 规格:
0.1 mL(40809ES01)/1 mL(40809ES03)
| 规格: | 0.1 mL(40809ES01) | 产品价格: | ¥575.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 1 mL(40809ES03) | 产品价格: | ¥3180.0 |
产品描述
Hieff Trans® mRNA转染试剂是一款针对mRNA细胞转染的阳离子多聚物转染试剂,对常规细胞、原代细胞、神经细胞都具有较高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-转染试剂复合物或更换新鲜培养基,也可根据细胞营养状态在4-6小时后更换新鲜培养基。
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。产品2-8ºC保存,一年有效。不可冷冻!
注意事项
1)转染操作时,以细胞融合度达70%-80%为佳,具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。
2)制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释mRNA和转染试剂。
3)使用无RNA酶污染的耗材与试剂。
4)2-8ºC保存,要注意避免多次反复长时间开盖。
5)初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。
6)本产品仅作科研用途!
操作流程(以24孔板为例,其他培养板加样体积请参考表一)
注:转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响,建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
1. 细胞铺板,至转染操作时,以细胞融合度达70%-80%为佳。
2. 按照以下体系配制mRNA-转染试剂复合物:
1)对于每孔细胞,使用10 μL无血清培养基(如OPTI-MEM培养基)稀释0.4 μg mRNA,轻轻混匀。
2)对于每孔细胞,使用10 μL无血清培养基(如OPTI-MEM培养基)稀释0.8-1.6 μL转染试剂,轻轻混匀,室温孵育5 min。
3)将稀释的mRNA与稀释的转染试剂轻轻混匀。
4)室温静置孵育20 min。
3. 将mRNA-转染试剂复合物逐滴加到细胞中,轻轻混匀。
4. 37℃,5% CO2培养箱培养24-96 h,直至进行基因表达分析。
不同细胞培养容器转染用量(仅供参考):
| 培养容器 | 表面积 | 每孔体积 | mRNA转染 | ||
| 培养基体积 | 稀释液体积 | mRNA | 试剂体积 | ||
| 96-well | 0.3 cm2 | 100 μL | 2×5 μL | 0.2 μg | 0.2-0.4 μL |
| 24-well | 2 cm2 | 500 μL | 2×10 μL | 0.4 μg | 0.8-1.6 μL |
| 12-well | 4 cm2 | 1 mL | 2×20 μL | 0.8 μg | 1.6-3.2 μL |
| 6-well | 10 cm2 | 2 mL | 2×50 μL | 1 μg | 2-4 μL |
| 60-mm | 20 cm2 | 5 mL | 2×100 μL | 4 μg | 8-16 μL |
| 10-cm | 60 cm2 | 15 mL | 2×300 μL | 12 μg | 24-48 μL |
【注】该表使用量仅供参考,mRNA与转染试剂具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。
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文献和实验preparation for microarray hybridizations or Northern blot analysis of weakly expressed genes, enriched mRNA preparations are preferable to total RNA. Enrichment of eukaryotic mRNAs derived from nuclear encoded genes is done by virtue of their poly(A) tail
Light-Induced mRNA Transfection
mRNA-based transfection is an attractive strategy for manipulation of gene expression for gain-of-function studies and therapeutic applications. As a potential therapeutic regulator, mRNA transfection has mainly been hampered by poor delivery
样本RNA提取、去除残留DNA及RNA质检后,我们需要决定是否以及如何去富集感兴趣的RNA。总RNA中含有大量的核糖体 RNA (rRNA),约占总RNA 80 – 98%的比例。对绝大多数 RNA-Seq 应用来说,需要去除 rRNA 或富集mRNA,以将测序资源集中在转录组所需的部分并节省成本。 除核糖体 RNA 外,样本还可能含有其他丰富的转录本,例如,血液样本中的珠蛋白 mRNA 可占所有 mRNA 分子的 30 – 80%。如果不除去这些占比很大的globin mRNA,我们测序











