公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)! 产品描述: 产品名称:2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load) 描述: 本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3x10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间,非常适用于1-20kb长片段的扩增。 产品特点: 高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。 快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上,可在较短时间内获得高产量的PCR产物。 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。 实验方法: 常用反应体系(50μl):
2×Fast Pfu Master Mix* |
25ul |
上游引物 |
0.2-1.0uM(终浓度) |
下游引物 |
0.2-1.0uM(终浓度) |
模板 |
1-50ng(质粒) 10ng-1ug(基因组) |
ddH2O |
至50ul |
*Mg 2+终浓度为2mM 常用PCR循环: 当扩增片段<3K;
94℃ |
1 分钟 30 秒 |
30 次循环 |
94℃,20 秒 |
50~60℃,20 秒 |
72℃,1kb/30 秒 |
72℃ |
5 分钟 |
4℃ |
保温 |
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);
94℃ |
5 分钟 |
30 次循环 |
94℃,5 秒 |
68℃,1kb/30 秒 |
72℃ |
5 分钟 |
4℃ |
保温 |
使用建议: Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3´端"A"突出,除使用PCR一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有: (1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。 (2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。 (3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。 储存/保存方法: -20℃ 有效期12个月 技术指标: 经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。 产品用途: 用于要求保真度比较高,扩增长度较长的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。 注意事项: (1)需溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。 (2)对高 GC 含量模板,建议将变性温度提高到98℃。 (3)对于高 GC 模板,建议配套使用 PCR 增强剂 I或者添加终浓度为 5%-8% DMSO。 absin,您身边的科研百宝箱 专业提供试剂、耗材、仪器,在线订购,7*24h全国发货,方便快捷! |