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组织线粒体分离试剂盒
企业认证
-20℃,有效期12个月。组分C常温保存。
12个月
Tissue Mitochondria Isolation Kit
现货
爱必信(上海)生物科技有限公司
-
50T
公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述:
产品名称:组织线粒体分离试剂盒
描述:
外观: 溶液
使用方法: 1、清洗:取新鲜组织(不宜采用冻存的组织),迅速称重 50~100mg,用预冷的 PBS 清洗1 次,冰上剪成 3mm2 大小的组织碎片。2、匀浆裂解:加入 10 倍体积的预冷的Mitochondria Lysis buffer(如需获得细胞浆蛋白,应提前加入 PMSF,至 PMSF 浓度为 1×),置于冰浴上 Dounce 匀浆器中,匀浆 10~20次。 不同组织或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同,需自行优化。3、离心:4℃,600g 离心 5min 以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为 2000g 离心 3min,其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。4、上清液转移至一干净离心管,4℃ 12000g 离心 10min。注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为6000g 离心 10min,其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。5、弃上清,沉淀为线粒体,如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白,应在本步骤中收集上清,并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的上清 12000g,4℃离心 10min,上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。6、保存:弃上清,用适当缓冲液悬浮沉淀。如果用于线粒体酶活性或功能的分析,线粒体沉淀应重悬于 Mitochondria Stock buffer;如果用于线粒体蛋白的分析,获得的细胞浆蛋白应保存于 1×Protein Stock buffer,即按细胞浆蛋白:Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合;如果用于双向电泳,应使用恰当的保存液。
储存/保存方法: -20℃,有效期12个月。组分C常温保存。
产品用途: 该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
注意事项: 1、试剂 (如 PMSF)对于不同实验不必全部使用,在实验条件成熟后可以不必使用。2、 如果不是用于制备线粒体蛋白,Mitochondria Lysis buffer 不必加入 PMSF。如果用于制备线粒体蛋白样品,Mitochondria Lysis buffer 需添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂加入到样品中前 1~2min 内加入,以免 PMSF 在水溶液中很快失效。3、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或 4℃进行,所用溶液需冰浴或 4℃预冷,全部操作时间尽量控制在 1h 以内。4、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 1000g 和 12000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不高,前后两次离心速度可用 2000g 和 6000g。5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品信息订购:
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89 人阅读发布时间:2023-07-18 15:58
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