SP悬浮细胞核酸转染试剂盒

一、产品介绍：

该产品是专门用于悬浮细胞核酸高效转染的试剂盒。它具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数悬浮细胞，在部分悬浮细胞中，转染效率可高达85%以上（EGFP质粒）。其功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA，还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同， 该产品采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后 24 小时细胞几乎无明显死亡。使用也非常方便，先将转染试剂与质粒 DNA 混合，再将转染试剂-DNA 复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
 

二、产品特点：

1、卓越的细胞转染性能：可高效转染多种悬浮细胞，转染效率可高达85%以上；

2、转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；

3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

4、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

操作步骤：

一、质粒DNA 转染（以24 孔板转染为例）：

A、细胞接种：

1、 转染前一天或者两天接种细胞，接种细胞量为4-7×10 ⁵ 个；

2、确保转染时细胞比活度为90%以上，且生长状态良好；

3、 如果细胞在转染前一天铺板，转染时可以不用换液，如果细胞在转染前两天铺板，转染时最好换液。
 

B、SP /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染)：

1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将DNA-培养基混合物滴加至SP-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： SP-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
 

C、转染：

1、 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团。

2、 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

3、 培养24~96小时后观察或收获。

4、 SP在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要，可以使用悬浮细胞培养专用的无血清培养基。

二、siRNA 转染（以24 孔板转染为例）：

A、细胞接种：

1、转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；

2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
 

B、 SP /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染)：

1、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、 将siRNA-培养基混合物滴加至SP-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。
 

C、转染：

1、 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团。

2、 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

3、37°C培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。

4、SP 在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
 

注意事项：

1、首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，SP 可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染，SP 用量2ul，siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。

2、在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免制备体系中存在血清，因血清会干扰SP 与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。

3、溶液A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液A。

4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。

5、悬浮细胞转染难度大，且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响，研究者在转染之前，应查阅相关文献，认真准备转染方案，并对转染效果有比较理性的判断。

6、本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用核酸共转染试剂abs60317。