PCR & DNA 片段纯化试剂盒

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产品描述：

产品名称： PCR & DNA 片段纯化试剂盒

描述:

本产品利用硅基质材料在高盐缓冲体系对DNA高效、专一吸附的原理，配备自主研发的膜结合液（又称溶胶液）和高性能的硅胶膜离心吸附柱，用于纯化PCR反应产物或其他酶促反应体系中的DNA片段，可有效去除蛋白质、残留dNTP、引物、盐分等其他杂质，对引物二聚体的清除率在70%以上。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的吸附量为20 μg，对100 bp-10 kb线性DNA片段的回收效率可高达95％^a，也可应用于20 kb以下环形质粒的脱盐纯化。整个操作可在10 min内完成，快速、简便。回收后的DNA可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。

^a 实际回收率可能因DNA片段的大小、初始浓度不同而有差异。

保存方法：常温保存，保质期24个月。
【实验准备】
1. 用户需自行准备的材料：无水乙醇，异丙醇，台式离心机。
2. 初次使用请按瓶标说明向每瓶膜漂洗液（MW）中加入相应体积的无水乙醇（用户自备），并在试剂瓶上做标记。
【操作步骤】
1. 柱平衡：向离心吸附柱中加入500 μl柱平衡液（BL），静止1 min，室温下12000 rpm离心1 min，弃除收集管中的废液，将离心吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的吸附柱）
2. DNA结合：按每1 μl DNA样品加入1 μl膜结合液（MB）的比例（1:1）加入膜结合液，混匀后转移到插入收集管的离心吸附柱内，室温静置1 min，室温下12,000 rpm离心1 min，弃除收集管中的废液，将离心吸附柱重新插回收集管中。
注：离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg，每次最多可离心 950 μl 溶液，如溶液体积大于 950 μl，可分批转移到同一吸附柱内，分次离心；若样品体积低于 50 μl，可用灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液（EB）补足至 50 μl，再加入 50 μl 的膜结合液（MB）。为增加小片段的回收效率，当回收的DNA 片段小于 400 bp 时，可加入 1:1 体积的异丙醇。
3. 清洗：加入700 μl膜漂洗液（MW，请确认已加入无水乙醇）于离心吸附柱中，室温下12,000 rpm离心30s,弃除收集管中的废液，将离心吸附柱重新插回收集管中。
4. 再次清洗：加入500 μl膜漂洗液（MW）于离心吸附柱中，重复离心一次。弃除废液后，将离心吸附柱去盖再次离心1 min，彻底去除残余漂洗液。
5. 洗脱：小心取出离心吸附柱，将其套入一个新的1.5 ml灭菌离心管中。向硅胶吸附膜的中央加入30 μl洗脱缓冲液（EB），室温静置1 min后，12,000 rpm离心1 min收集纯化的DNA片段。
注：为提高回收片段浓度，离心收集后可将洗脱后的溶液再次加入离心吸附柱中重复洗脱一次，可提高约 20%的产量；如必须使用无菌去离子水洗脱，需注意其 pH 值是否接近中性，否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调节至 7.0-8.5 之间。
6. 储存：弃除离心吸附柱，获得的DNA片段可直接用于后续反应或于-20℃长期保存。

参考文献
1） ChunJie Guo, XuKai Ma, YuHang Xing, et al. Distinct Processing of lncRNAs Contributes to Nonconserved Functions in Stem Cells. Cell (2020), https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.03.006 IF: 36.216
2） ChuXiao Liu, Xiang Li, Fang Nan, et al. Structure and Degradation of Circular RNAs Regulate PKR Activation in Innate Immunity. Cell (2019), https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.03.046 IF: 30.4
3） ChuXiao Liu, XiangLi, FangNan, et al. Structure and Degradation of Circular RNAs Regulate PKR Activation in Innate Immunity. Cell. 2019; 177(4): 865-880. IF: 24.38
4） Yunpeng Xu, Zhidong He, Mengjiao Song, et al. A microRNA switch controls dietary restriction induced longevity through Wnt signaling. Embo Rep. 2019, 20:e46888 https://doi.org/10.15252/embr.201846888 IF: 5.28

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