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- 爱必信(absin)
- abs60250
- 上海
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存，有效期24个月。
- 保质期：
24个月
- 英文名：
LightNing DNA Assembly Mix Plus
- 库存：
现货
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- CAS号：
-
- 规格：
50rxns
| 公告提醒：爱必信所有产品和服务仅用于科学研究，不用于临床应用及其他用途提供产品和服务（也不为任何个人提供产品和服务）!
产品描述： 产品名称：快速多片段DNA组装预混液 描述: 基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据 DNA 片段与线性化载体末端的 15~25 nt 同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的 DNA 定向克隆技术。
浓度: 2 × 使用方法: 实验步骤
a. 最适载体用量(ng) = 0.02 × 载体碱基对数，即0.03 pmol。 b. 插入单片段，最适片段用量（ng）= 0.04 × 片段碱基对数；插入多片段，每片段最适用量（ng）= 0.02 × 片段碱基对数。 注1：若插入单片段的长度大于载体，则应互换载体与插入片段用量； 注2：若插入片段的长度小于200 bp，则插入片段应使用5 倍载体用量； 注3：若按上述公式计算得到的用量超过最低/ 最高值，则建议直接按最低/ 最高用量使用； 注4：载体片段过长、插入片段过长或片段数过多，克隆阳性率均会降低。 重组反应体系配制完成后，用移液枪轻轻吸打混匀各组分，避免产生气泡，切勿涡旋。 ② 将反应体系置于50℃，反应5~60 min。 注1：推荐使用 PCR 仪等温控比较精准的仪器进行反应，反应时间不足或太长克隆效率均会降低； 注2：插入1~2 个片段时，推荐反应时间为5~15 min；插入3~5 个片段时，推荐反应时间为15~30 min； 注3：当载体骨架在10 kb 以上或插入片段在4 kb 以上时，建议延长反应时间到30~60 min； 注4：50℃反应完成后，建议进行瞬时离心，将反应液收集至管底。 ③ 将反应液离心管置于冰上冷却，之后进行转化或者储存于 -20℃。 注 1： -20℃储存的重组产物，建议在 1 周内使用。 6. 重组产物转化 取5~10 μl 反应液，加入到100 μl 感受态细胞中，缓慢吸打混匀，冰上放置30 min。42℃ 热激45~60 sec，冰浴5 min。加500 μl SOC或 LB 培养基，37℃ 振荡培养40~60 min（200 rpm）。将菌液均匀涂布在含有对应抗生素的平板上，倒置于37℃ 过夜培养。 注1：不同感受态细胞最后的克隆阳性率会有所差别，推荐使用转化效率 > 108 CFU/μg的感受态细胞； 注2：菌落数取决于PCR 产物与线性化载体的数量和纯度； 注3：阳性对照平板通常生长大量白色单菌落，阴性对照平板只生长很少的菌落。 7. 阳性克隆检测 挑取单菌落至10 μl ddH2O 中混匀，95℃裂解10 min 后，取1 μl裂解液作为模板，进行菌落PCR 鉴定，或将单菌落接种至抗性培养基中培养过夜后，提取质粒进行酶切鉴定。阳性对照的阳性克隆检测，菌落PCR 引物使用通用引物M13F 与M13R，酶切鉴定用HindIII 与EcoRI。 注1：菌落PCR 时建议至少使用一条通用引物，避免假阳性结果； 注2：必要时可进一步对阳性结果进行测序鉴定。 注3：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT M13R：CAGGAAACAGCTATGAC 储存/保存方法: -20℃保存，有效期24个月。
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