人恶性胶质瘤细胞带荧光素酶;U87 MG/LUC
产品编号:CL-480h
细胞特性
1. 来源:恶性神经胶质瘤;
2. 含量:>1x106cells;
3. 生长特性:贴壁生长;
4. 细胞形态:上皮样;
5. 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装;
6. 用途:仅供科研使用。
7. 该细胞系由Ponten J等建立,源于恶性神经胶质瘤,裸鼠皮下接种可成瘤。
培养基及培养冻存条件准备
完全培养基 |
DMEM+10%FBS |
培养条件 |
37℃;5%CO2+95%空气;培养箱湿度为70%-80%;消化时间1分钟左右,每传 10 代左右,用嘌呤霉素(4ug/ml)巩固一下。 |
冻存液 |
无血清细胞冻存液 |
运输和保存
1. 1mL冻存管装细胞:干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. T25瓶复苏的存活细胞:常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理:
1. 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱中放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们;
2. 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×、20×各2-3张)以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据;
3. 贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基5-6mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4. 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
一、细胞复苏:
1. 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;
2. 在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞;
3. 将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。
二、细胞传代:
1. 将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);
2. 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散;
3. 将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养;
4. 注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%-90%时,重复传代操作或者冻存。
三、细胞冻存:
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
网址:www.51cells.cn