NG108-15 小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞
产品编号:CL-161m
细胞介绍
NG108-15细胞株原名108CC15,由Bernd Hamprecht于1971年建立。这个细胞由小鼠N18TG2神经母细胞瘤细胞和大鼠C6-BU-1神经胶质瘤细胞在失活仙台病毒存在下融合而成。
细胞特性
来源:小鼠N18TG2神经母细胞瘤细胞和大鼠C6-BU-1神经胶质瘤细胞
形态:扁平;圆形 成纤维细胞样 贴壁生长
含量:>1x10⁶cells
规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
用途:仅供科研使用
细胞运输、保存及注意事项
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复苏细胞 |
冻存细胞 |
包装 |
充液的T25细胞培养瓶 |
1mL冻存管 |
运输条件 |
常温 |
干冰 |
保存方式 |
75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱 |
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏 |
注意事项 |
① 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们; ② 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照,10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据; ③ 贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收; ④ 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。 |
培养基及培养冻存条件准备:
完全培养基 |
DMEM 培养基 +优质胎牛血清 10% +双抗,1% |
培养条件 |
气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃;培养箱湿度为70%-80% |
冻存液 |
90%血清 + 10%DMSO,现用现配 |
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm/min离心3~5min,弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后,均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中,置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。
注意:建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩,避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。
(二)细胞传代
① 待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养。
② 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次,吸净残余的PBS。
③ 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落,即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台,加入2倍体积的、含10%FBS的培养基终止消化。
④ 将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min离心3-5min,弃去上清液。
⑤ 向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞,轻吹混匀。将细胞悬液按1:1比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中,添加6~8mL完全培养基,置于37℃恒温细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(三)细胞冻存
① 细胞冻存时,步骤同细胞传代的①~④,细胞计数后,加入配制好的细胞冻存液,重悬细胞,按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
② 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。