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北京云肽生物科技有限公司
产品品牌:Qiagen
产品名称:逆转录试剂盒
产品货号:218161
产品规格:50T

使用miScript PCR System,对包含miRNA的总RNA进行逆转录
- 灵敏和特异性的检测miRNA
- 利用单一cDNA定量检测多种miRNA
- 利用同一cDNA定量检测miRNA和mRNA
- 利用同一cDNA定量检测成熟miRNA和miRNA前体
- 专有技术合成RNA,评估逆转录效率
Principle
miScript PCR System应用SYBR Green-based real-time PCR,能够灵敏和特异性地进行miRNA的定量和谱分析。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA及后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。
Qiagen逆转录试剂盒218161
miScript PCR System包含以下组分:
miScript II RT Kit,可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。
miScript SYBR Green PCR Kit,包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer,配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。
miScript Primer Assay或miScript Precursor Assay,前者为miRNA特异性正向引物,用于检测成熟miRNAs。后者包含正向和反向引物,靶向作用于miRNA前体的颈环序列。该产品使用miRBase中的较新序列信息设计。
miScript miRNA PCR Array,miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays被预先设定,单次使用的PCR孔板/孔盘可快速分析成熟miRNAs。
miScript miRNA PCR Array data analysis tool,免费的基于网络的工具,简化了用于miScript miRNA PCR Arrays相对定量的ΔΔCT方法。
miScript II RT Kit双缓冲体系
miScript II RT Kit包含miScript Reverse Transcriptase Mix、10x miScript Nucleics Mix、5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript Reverse Transcriptase Mix是一种经优化的poly(A)聚合酶和逆转录酶混合物。miScript Nucleics Mix包含dNTPs、rATP、oligo-dT引物和内部合成RNA对照(miRNA逆转录对照[miRTC]),可评估使用miScript miRNA PCR Arrays进行谱分析实验的逆转录性能(获取更多信息,请参考miScript miRNA PCR Array Handbook)。
miScript II RT Kit提供两种缓冲液:miScript HiSpec Buffer和miScript HiFlex Buffer,满足使用real-time PCR进行miRNA定量研究的特别要求(参见"miScript II RT Kit buffers")。miScript HiSpec Buffer配合miScript miRNA PCR Arrays和miScript Primer Assays进行成熟miRNA谱分析和定量实验时,提供理想的结果。miScript HiFlex Buffer适合于低通量miRNA定量实验,从同一样本进行如miRNA、mRNA和前体miRNA等不同种类的RNA的定量实验除外。
miScript HiSpec Buffer进行逆转录实验
使用miScript HiSpec Buffer进行逆转录反应,确保成熟miRNAs的选择性转化,miScript PCR Controls靶向转至cDNA。使用oligo-dT引物,成熟miRNAs通过poly(A)聚合酶加尾后,被逆转录至cDNA(参见"Selective conversion of mature miRNAs into cDNA in miScript HiSpec Buffer")。加尾和逆转录在同一试管内同时进行。oligo-dT引物有一个3'退化锚点和一个在5'端的通用标签序列,可在real-time PCR步骤扩增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit,确保通过real-time PCR灵敏、特异性的定量miRNA。加尾和通用标签保证miScript Primer Assays不会检测到基因组DNA。
miScript HiFlex Buffer进行逆转录实验
使用miScript HiFlex Buffer进行逆转录反应,可使所有种类的RNA转化至cDNA(参见"Simultaneous conversion of all RNA species into cDNA in miScript HiFlex Buffer")。使用oligo-dT引物,成熟miRNAs通过poly(A) 聚合酶加尾后,被逆转录至cDNA。加尾和逆转录在同一试管内同时进行。oligo-dT引物有一个3'退化锚点和一个在5'端的通用标签序列,可在real-time PCR步骤扩增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit,确保通过real-time PCR定量miRNA。加尾和通用标签确保miScript Primer Assays不会检测到基因组DNA。其它种类RNA(包括miRNA前体、其它非编码RNA和mRNA)使用oligo-dT和随机引物转化至cDNA。配合miScript SYBR Green PCR Kit,使用合适的检测进行real-time PCR的RNAs检测(如用于非编码RNA检测的miScript Primer Assays 、用于miRNA前体检测的miScript Precursor Assays和用于mRNA检测的QuantiTect Primer Assays)。
Procedure
逆转录反应操作简单。包含miRNA的总RNA作为逆转录反应的起始材料。逆转录是一个简单的流程,包括在37oC条件下进行1个小时的孵育反应及在95oC条件下的简单孵育后进行的灭活反应。
Applications
miScript II RT Kit作为miScript PCR System的一部分,用于:
- 成熟miRNA定量检测和谱分析
- 同时检测miRNA和mRNA
- 同时检测成熟miRNA和miRNA前体
- 检测snoRNA和其他非编码RNA
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| 品牌 | 名称 | 货号 | 包装规格 |
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| Qiagen | 荧光定量PCR试剂盒 | 218073 | 200T |
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| Qiagen | 血液/组织基因组DNA提取试剂盒 | 69504 | 50T |
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| Qiagen | 植物总RNA小提试剂盒 | 74904 | 50T |
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| Qiagen | 组织样品RNA稳定液 | 76106 | 250ml |
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| Qiagen | DNA酶套装 | 79254 | 50T |
| Qiagen | 质粒中提试剂盒 | 12243 | 25T |
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| Qiagen | 离心柱 | 79654 | * |
| Qiagen | 核苷酸去除试剂盒 | 28304 | 50T |
| Qiagen | 石蜡包埋组织miRNA和总RNA纯化试剂盒 | 217504 | 50T |
| Qiagen | DNA Maker | 929559 | 50ul |
| Qiagen | 逆转录试剂盒 | 205313 | 200T |
| Qiagen | 退火缓冲液 | 979009 | 250ml |
| Qiagen | 转染级质粒纯化试剂盒 | 10023 | 25T |
| Qiagen | 微量样本miRNA和总RNA提取试剂盒 | 217084 | 50T |
| Qiagen | 转染级质粒或柯斯质粒DNA提取试剂盒 | 10091 | 5T |
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| Qiagen | 质粒中提试剂盒 | 12945 | 100T |
| Qiagen | 血液和培养细胞中高分子量DNA小提试剂盒 | 13323 | 25T |
| Qiagen | P1缓冲液 | 19051 | 500ml |
| Qiagen | P2缓冲液 | 19052 | 500ml |
| Qiagen | P3缓冲液 | 19053 | 500ml |
| Qiagen | 基因组DNA提取缓冲液套装 | 19060 | Genomic tip |
| Qiagen | 溶解和结合缓冲液Buffer QG | 19063 | 250ml |
| Qiagen | Buffer AW1 | 19081 | 242ML |
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| Qiagen | 蛋白酶K | 19131 | 2ml |
| Qiagen | 收集管 | 19560 | 10x96 |
| Qiagen | 收集管盖 | 19566 | 120x8 |
| Qiagen | 噬菌体DNA纯化试剂盒 | 27704 | 50T |
| Qiagen | 重力流纯化柱 | 30622 | 12x1.5ml |
| Qiagen | 谷胱甘肽基质 | 30971 | 5x1ml |
| Qiagen | 高纯度线粒体提取试剂盒 | 37612 | 12T |
| Qiagen | 哺乳动物细胞总蛋白提取试剂盒 | 37901 | 100T |
| Qiagen | 微生物DNA纯化试剂盒 | 50214 | 50T |
| Qiagen | 病毒RNA/DNA自动高通量提取试剂盒 | 54161 | 5T |
| Qiagen | 甲基化分析实验对照 | 59655 | 100T |
| Qiagen | 植物/真菌总DNA试剂盒 | 68163 | 24T |
| Qiagen | 甲基化分析标准对照DNA液 | 70042 | 1000T |
| Qiagen | RNA提取试剂盒 | 74204 | 50T |
| Qiagen | 石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒 | 74404 | 50T |
| Qiagen | 脂肪组织总RNA小提试剂盒 | 74804 | 50T |
| Qiagen | 细胞RNA稳定试剂 | 76526 | 250ml |
| Qiagen | 脂肪和标准组织样本裂解试剂 | 79306 | 200ml |
| Qiagen | DNA/RNA和蛋白质共纯化试剂盒 | 80004 | 50T |
| Qiagen | 细胞总RNA提取试剂盒 | 80224 | 50T |
| Qiagen | 组织切片基因组DNA和总RNA纯化试剂盒 | 80234 | 50T |
| Qiagen | DNA/RNA共纯化试剂盒 | 80284 | 50T |
| Qiagen | 洗涤液 | 979008 | 200ml |
| Qiagen | 难裂解组织DNA/RNA/miRNA提取试剂盒 | 129056 | 200x2ml |
| Qiagen | RNA酶抑制剂 | 129916 | 500reactions |
| Qiagen | 微量样本全基因组扩增试剂盒 | 150025 | 100T |
| Qiagen | 单细胞全基因组扩增试剂盒 | 150343 | 24T |
| Qiagen | 单细胞全基因组扩增试剂盒 | 150345 | 96T |
| Qiagen | 酵母和细菌高品质DNA纯化试剂盒 | 158567 | 200ml |
| Qiagen | 蛋白沉淀液 | 158912 | 350ml |
| Qiagen | taqDNA聚合酶预混液试剂盒 | 203443 | 250U |
| Qiagen | 微卫星位点多重PCR分析试剂盒 | 206241 | 70T |
| Qiagen | 一步法RT-PCR试剂盒 | 210210 | 25T |
| Qiagen | 血清/血浆无细胞总RNA提出试剂盒 |
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文献和实验Qiagen MIDI protocol(QIAGEN plasmid Midi试剂盒)
质粒DNA的提纯是基因工程实验中最常用的试验方法之一,质粒DNA提纯效率和质量与其后续实验步骤(如PCR扩增、酶切、连接、转化大肠杆菌和转染真核细胞等)的成功与否有着直接的关系,因此高效快速地从细菌细胞中提纯质粒DNA 具有重要的意义,本文主要介绍了由QIAGEN plasmid Midi试剂盒方法提取质粒的方法。1. Pick a single colony from a streak plate and inoculate 25 ml of LB with appropriate
提供miRNA定量检测启动装,一个试剂盒里面包含逆转录、内参引、阳性对照、real-time PCR扩增所有的组分,您很快就可以学会定量分析microRNA的表达量了。 实验进行到这里,只是在进行miRNA量变的研究,更进一步可以升华到某些特定miRNA功能的探索,采用类似RNAi沉默技术,miRNA同样可以被沉默或者高表达,QIAGEN提供miRNA Inhibitors和miRNA Synthesis 产品来分别完成,详细的实验方案请见下回分解。 microRNA 研究实验导航—功能分析 找到差异
,或者用RNase-Free的DNase处理RNA样品。在这里我们介绍一些常用的RNA纯化试剂盒,特别是由Affymetrix公司推荐的QIAGEN RNA纯化系列。* RNeasy Protect Kit:一旦生物样品被收集分离,它的RNA会立刻变得非常不稳定,极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解,或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析(Array Analysis)、定量RT-PCR等实验来说,采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态,是精确
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