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Sialic Acid Quantitation Kit
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≥1
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asnail
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n-乙酰神经氨酸醛缩酶:25 µL - ~100 U/ml、Sialidase Au:25 µL - 5 U/ml、L-乳酸脱氢酶:25 µL - 1000 U/ml、β-NADH, Disodium salt:25 mg、Fetuin, Bovine:0.5 mg、N-乙酰神经氨酸:0.01 M - 100 µL、Tris-HCl:1.0 M, pH 7.5 - 1 ml、唾液酸酶缓冲液:250 mM 磷酸钠, pH 5 - 500 µL
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文献和实验发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
大家都知道进行绝对定量需要标准曲线,有些用户认为进行相对定量时就不需要标准曲线了,可以通过 2-ΔC'T来计算,但这一计算是有条件的,即所有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%,可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用 2-ΔC'T 来计算了。这是错误的,会得到错误结论。无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒,最好买够试剂,以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂,由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别,如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等,可能会
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量;为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量;为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒,如BCA定量试剂盒等,操作起来,简便快捷。当然也有不少实验室,还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
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