三.细胞培养操作 A.培养基及培养冻存条件: 1)完全培养基:角质细胞无血清培养基 (,包含两个组份:基础培养基1瓶+生长因子1管)或者 Defined K-SFM (Gibco part of kit NO:,10744-019) ,添加对应因子,1%双抗来培养细胞。 备注:Defined K-SFM (Gibco part of kit NO:,10744-019)培养液包含两个组份:基础培养基1瓶(货号10785-012)+生长因子1管( 货号10784-015)。 2)注意:使用0.05%胰酶消化细胞,由于Defined K-SFM为无血清培养液无法终止胰酶消化,所以消化完成后要通过离心(建议125xg离心5到10分钟)去除胰酶或者用带10%血清的培养基来终止消化,再进行后续操作。 3)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 4)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 B.复苏细胞、细胞传代、细胞冻存:
加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。