- ￥1500
- IMMOCELL
- IM-M111
- 厦门
- 2025年12月31日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
小鼠细胞株
- 细胞类型：
上皮细胞样
- 肿瘤类型：
详询
- 供应商：
IMMOCELL
- 库存：
9999
- 英文名：
M-1
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
详询
- 运输方式：
顺丰快递
- 器官来源：
小鼠
- 是否是肿瘤细胞：
详询
- 细胞形态：
上皮细胞样
- 免疫类型：
详询
- 物种来源：
小鼠细胞株
- 相关疾病：
详询
- 组织来源：
肾
小鼠肾集合管细胞(SV40转化)M-1
产品基本信息
细胞名称：M-1，小鼠肾集合管细胞
种属来源：小鼠
组织来源：肾
细胞形态：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
培养基:： D/F12+10% FBS+PS
生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃
传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
支原体检测：无
细胞培养操作
1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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文献和实验）猴病毒40（SV40） 猴病毒40（SV40）的基因组常用来作为克隆载体，把外源DNA转入哺乳类细胞。猴病毒40是球形动物病毒，直径40nm，呈20面体，有一个共价闭环的双链DNA基因组，全长5244bp。它在猴肾中增殖。被SV40感染的细胞都会出现SV40的T抗原。早已证明完整的小鼠染色体β珠蛋白基因（包括所有的间插顺序和两侧顺序）整合在SV40中后，在被感染的猴肾细胞中都能正确地转录和翻译。表明猴肾细胞的拼接系统能有效地处理小鼠β珠蛋白的初级转录本。 可是，SV40作为克隆载体有其局限
发生错义突变。由于突变使 p53 的结构改变，产生了新的特性，这就解释了长期以来认为它和致癌有关的一些现象。 p53 也是一种核内的磷蛋白。是最主要的肿瘤抑制物，人类一半以上的癌都显示出或是 p53 蛋白的缺失，就是 p53 基因的突变。它开始是在 SV40- 转化细胞中发现与 T 抗原相结合。在很多转化细胞或肿瘤细胞系中发现 p53 蛋白的量大大增加。在早期实验中发现克隆的 p53 会导致细胞无限制生长，因此把 p53 作为一种癌基因，通常它的作用是显性
培养基：用含10%胎牛血清的DMEM培养液配制G418，G418浓度为200～800mg/L注意：对受体细胞先做预试验，选用浓度为在10～14天内能杀死细胞50%以上的最低浓度。2、操作步骤：(1)供体DNA制备：方法按前介绍的DNA提取法提取，溶于TE中，40mg/L。(2)受体细胞的培养：研究癌基因转移应选择不含人类Alu序列的动物细胞系作为受体细胞。如小鼠NIH3T3胚成纤维细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104/cm2,用含10%胎牛血清的DMEM液
