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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
S-AKP/ALP测试盒
- 库存:
726
- 供应商:
江西江蓝纯生物有限公司
- 规格:
50管/48样
测定方法:分光光度法
测定规格:50管/48样
保存条件:低温避光保存
测定意义:
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其适pH范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
测定原理:
碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。
显色反应:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50 μL蒸馏水,100 μL试剂三,20 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830 μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A空白管。
3. 标准管:取1mL玻璃比色皿,加入50 μL标准液,100 μL试剂三,20 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830 μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A标准管。
4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50 μL上清液,100 μL试剂三,20 μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830 μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A测定管。
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
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文献和实验; V 0 -原溶液的体积; S 1 -原溶液中有机溶剂的浓度 S 2 -要求达到的有机溶剂浓度; 100-指加入的有机溶剂浓度为100%。如所加入的有机溶剂的浓度为95%,上式(100一S2)项应改为(95一S2)。 在大规模制备沉淀时,若溶剂浓度的要求不太严格时,可用简单的交叉方法求出。 本实验采用有机溶剂沉淀法从肝匀桨中分离纯化碱性磷酸酶(简称AKP)。先用低浓度醋酸钠(低渗破模作用)制备肝匀浆。醋酸镁则有保护
主要方法。林一贝(Lineweaver—Burk)氏根据米—曼氏方程式又推导如下方程式: 以不同的底物浓度1/[S]为横坐标1/v为纵坐标,按直线回归方程计算,作图,并向纵轴方向延长,此线在横轴上截距为1/Km的负值。 本实验以碱性磷酸酶为例,选择不同浓度的磷酸苯二钠为其底物,磷酸苯二钠被AKP水解后,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色的深浅可测出酶活力高低,其反应式如下
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