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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
β-GAL含量测试盒
- 库存:
321
- 供应商:
江西江蓝纯生物有限公司
- 规格:
100管/48样
测定方法:微量法
测定规格:100管/48样
保存条件:低温避光保存
测定意义:
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。
测定原理:
β-GAL分解对-硝基-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液等液体样本:直接检测
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
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文献和实验一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。 EC3. 2. 1. 23。一般是指能将β -半乳糖苷水解为半乳糖和糖苷的酶。很早以来,就被认为是大肠杆菌诱导酶的典型。分子量 54万,为四聚体。其结构基因为 LacZ,与 LacY(半乳糖苷透性酶)和 LacA(半乳糖苷转乙酰酶)同组成乳糖操纵子,并在特异的乳糖操纵系统中的阻遏物、操纵基因、启动子等的协同下,支配调节β -半乳糖苷酶的合成。当培养基中无诱导物质时,每一细胞中虽然没有几个分子的β -半乳糖苷酶;但一旦被诱导,则每一
相关专题 一、简介 X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈蓝色,因此常用于转基因筛选试验中,如蓝白斑筛选或β-半乳糖苷酶的原位染色检测实验。蓝白斑试验中主要根据菌落呈现的颜色即可简单的挑选出哪些是转化子。 分子 式为C14H15BrClNO6,分子量为408.63,CAS Number 7240-90-6。 X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC
材料: LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖,含有X-gal。对于3ml顶层琼脂,加40µl 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂(47℃)中。 大肠杆菌铺平板细菌。只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株,可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。 方法: 1. 将λ噬菌体原种于SM+明胶液稀释。 2. 用10µl适当稀释的λ噬菌体感染0.1ml铺平板细菌。感染培养











