土壤几丁质含量测定试剂盒/可见分光光度法

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。

试剂组成和配制：
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理：
新鲜土样风干，过30-50目筛。

计算公式：
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反总÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.63mL；W：样本质量，0.2g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

注意事项：
1．试剂一充分混匀后再使用。