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- 国内
- JCsw_1838
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
C4H测试盒
- 库存：
828
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
50管/48样
注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
C4H 又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌类中，该酶催化肉桂酸羟
化作用产生4-香豆酸盐，是苯丙烷途径中继L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二个关键酶。
测定原理：
C4H 催化肉桂酸和NADP 生成4-香豆酸盐和NADPH，在340nm 下测定NADPH 生成速率，
即可反映C4H 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体60 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次 ）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）取试剂二一瓶，加入25mL 试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其
它物种）水浴5min；现配现用（配后 24h 内用完）；
（2）在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 试剂二，混匀，立即记录340nm 处初
始吸光值A1 和 5min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
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文献和实验过程一致。 【实验安排】 第一天：处理实验所用的玻璃、塑料用品和配DEPC无菌水、水饱和酚； 第二天：高压灭菌所浸泡的塑料用品以及配变性液；处理组织样品，并进行实验至步骤5）：放置过夜； 第三天：完成实验并进行总RNA的质量检测：光吸收法和琼脂糖凝胶电泳法。 【实验报告要求与思考题】 1、计算出所提取的总RNA的A260/A280值以及浓度。 2、写出3种常用的RNA酶的抑制剂及其作用机理。 附：紫外分光光度计的使用方法 1、使用前，打开电源
等。抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。一个抗原分子可带有不同的决定簇。1.2 抗体1.2.1 抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原
水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。 （四）包装:对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。 二、消毒和灭菌 微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因 （一）物理消毒法 1、紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强
