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碱性磷酸酶活性检测试剂盒 |
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6个月
ALP含量测试盒
218
上海机纯实业有限公司
100T/48S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义: AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。 测定原理:在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制:试剂一:液体×1瓶,4℃保存。试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。标准品:液体×1支(EP管中),2 μmol/mL酚标准液,4℃保存。粗酶液提取:1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。2.细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。3.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。测定步骤:1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。4. 标准管:取EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。5. 对照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸馏水,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。6. 测定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。注意:空白管和标准管只需测定一次。
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