果糖-6-磷酸果糖激酶(PFK)/6-磷酸果糖激酶/果糖-6

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PFK（EC 2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。

测定原理：
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入2.8mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20度保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入260μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20度保存，禁止反复冻融；
试剂四：液体16μL×1支，4℃保存，临用前加入260μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20度保存，禁止反复冻融；

样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为1000~5000：1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。