硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)科研专用测试盒/可见分光光度

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

测定原理：
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412 nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：
试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5 mL蒸馏水溶解。

粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.  血清等液体：直接测定。

TrxR测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入100μL试剂二，100μL试剂三，700μL试剂一，100μL上清液，迅速混匀后于412 nm测定10 s和310 s吸光度，记为A3和A4。△A测定管=A2-A1。