还原型维生素C检测试剂盒(二氯-酚靛酚比色法)

还原型维生素C检测试剂盒(二氯-酚靛酚比色法)
产品简介：
维生素C(VitaminC)是一种具有抗氧化性质的有机化合物，又称抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，同时也是一种辅酶，为酸性己糖衍生物，是烯醇式己糖酸内酯，可保护身体免于自由基的威胁，其广泛的食物来源为新鲜的蔬菜和水果，Vc有L-抗坏血酸和D-抗坏血酸，而且两种都具有强还原性，但只有L-抗坏血酸对人体具有生物活性。L-抗坏血酸有还原型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸两种，前者含量较高，在一般蔬菜和水果中占90%以上，L-还原型抗坏血酸极易被氧化为L-脱氢抗坏血酸；L-脱氢抗坏血酸亦可被还原为L-还原型抗坏血酸，通常也称作氧化型抗坏血酸。

还原型维生素C检测试剂盒(二氯-酚靛酚比色法)检测原理是向一定提取液中加入过量的2,6-二氯-酚靛酚染料溶液，与还原型抗坏血酸作用后，2,6-二氯-酚靛酚被还原，多余的2,6-二氯-酚靛酚可用二甲苯萃取比色，待测液中抗坏血酸的含量与二甲苯萃取的颜色呈线性负相关，即待测液中抗坏血酸含量越高，未被还原的染料就越少，二甲苯萃取的颜色就越浅，由于水溶性的花青素不溶于二甲苯，因此不影响测定结果，常用于蔬菜、水果中还原型维生素C含量的测定，特别适用于花青素含量高的蔬菜类样品。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、新鲜蔬菜或水果等样品
2、组织捣碎器、匀浆器
3、滤纸、漏斗
4、容量瓶(10ml50ml)
5、蒸馏水、二甲苯
6、分光光度计、比色杯

操作步骤(仅供参考)：
1、配制1×组织匀浆液：按组织匀浆液(12×)：蒸馏水=1：11的比例稀释，即得。
2、配制2×组织匀浆液：按组织匀浆液(12×)：蒸馏水=1：5的比例稀释，即得。
3、制备样品提取液：清洗干净新鲜蔬菜或水果，用布或吸水纸吸干表面水分或自然晾干。称取1g，加入1.5ml的2×组织匀浆液，置于组织捣碎器中打成浆状，滤液倒入50ml容量瓶内，滤渣可用1×组织匀浆液重复匀浆1~2次，合并滤液倒入容量瓶内，加入0.5ml硫酸锌溶液，摇动容量瓶，再加入0.5ml亚铁盐溶液，晃动以除去脂溶性色素，再用1×组织匀浆液定容至刻度，摇匀后过滤至干净小烧杯中备用。
4、配制VitaminC标准液：取少量1×组织匀浆液加入10mgVitaminC标准中，充分混匀，然后完全转移至10ml容量瓶，用1×组织匀浆液稀释至刻度，即为VitaminC标准储液(1mg/ml)；再取0.5ml标准储液加入10ml容量瓶中，用1×组织匀浆液稀释至刻度，即为VitaminC标准液(0.05mg/ml)；注意：Vc标准液临用前配制。
5、配制二氯-酚靛酚溶液：取少量二氯-酚靛酚稀释液加入10mg二氯-酚靛酚中，充分混匀，然后完全转移至二氯-酚靛酚稀释液中，即得二氯-酚靛酚储液(如有必要，可加热助溶)。临用前，按二氯-酚靛酚储液：蒸馏水=1：4的比例稀释，即得二氯-酚靛酚溶液，此溶液每毫升约相当于含有0.1mg的维生素C。
6、配置Vc梯度标准：按下边分别吸取VitaminC标准液和1×组织匀浆液，(单位：ml)
7、维生素C加样：按照下表设置标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入；如果样品中
的Vc浓度过高，可减少样品用量，可补加1×组织匀浆液后再进行测定，样品的检测能设置平行管。
8、维生素C测定：迅速摇动约30s，静置后二甲苯与水层分离，吸取各管上层二甲苯层萃取溶液倒入1cm比色皿中，以二甲苯做空白调零，分光光度计测定各管500nm吸光度(即为A标准、A测定)。

计算：以系列维生素C含量(0、15、30、37.5、45、60ug)为横坐标，对应吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程；A测定代入回归方程求得待测样品中维生素C含量。

注意事项：
1、组织匀浆液(12×)久置或低温保存，容易产生乳白色浑浊；如果白色浑浊不明显，可以
直接使用，不影响效果；如果白色浑浊较多，应弃用。
2、配的VitaminC标准液4℃避光保存，4周有效(临用前配制)，也可-20℃保存。
3、配制的二氯-酚靛酚储液4℃避光保存，配的二氯-酚靛酚溶液4℃避光保存，1周有
效；如有条件可称取二氯-酚靛酚10mg，加入10ml二氯-酚靛酚稀释液充分溶解，可避免浪费试剂。
4、该试剂盒提供的组织匀浆液可用于大部分的蔬菜和水果等样品，可抑制抗环血酸氧化
酶活性。
5、样品提取液要避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
6、测定溶液中含有二甲苯等有机溶剂，不能用塑料比色皿测定。