还原型维生素C检测试剂盒(二氯酚靛酚滴定法)

还原型维生素C检测试剂盒(二氯-酚靛酚滴定法)
产品简介：
维生素C(VitaminC)是一种具有抗氧化性质的有机化合物，又称抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，同时也是一种辅酶，为酸性己糖衍生物，是烯醇式己糖酸内酯，可保护身体免于自由基的威胁，其广泛的食物来源为新鲜的蔬菜和水果，Vc有L-抗坏血酸和D-抗坏血酸，而且两种都具有强还原性，但只有L-抗坏血酸对人体具有生物活性。L-抗坏血酸有还原型抗坏血酸和氧化型抗坏血酸两种，前者含量较高，在一般蔬菜和水果中占90%以上，L-还原型抗坏血酸极易被氧化为L-脱氢抗坏血酸；L-脱氢抗坏血酸亦可被还原为L-还原型抗坏血酸，通常也称作氧化型抗坏血酸。

还原型维生素C检测试剂盒(二氯-酚靛酚滴定法)检测原理是还原型维生素C易被氧化型的2,6-二氯-酚靛酚氧化成氧化型维生素C，2,6-二氯-酚靛酚不仅是一种氧化剂，而且是一种酸碱指示剂，在中性和碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中为红色，而被还原的2,6-二氯-酚靛酚为无色，当用2,6-二氯-酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时维生素C尚未完全被氧化前，滴下的2,6-二氯-酚靛-酚立即被还原成无色；一旦维生素C全部被氧化时，滴下的2,6-二氯-酚靛酚立即被氧化成粉红色，因此当溶液从无色转变为微红色时即表示维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点，如果无其他杂质干扰，待测样品所还原的标准2,6-二氯-酚靛酚量与样品中所含的还原型维生素C量成正比，常用于蔬菜、水果极其制品中还原型维生素C含量的测定。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、组织捣碎器、匀浆器
2、滤纸、漏斗
3、50ml容量瓶
4、100ml三角烧瓶
5、10ml吸管
6、5ml微量滴定管

操作步骤(仅供参考)：
1、配制1×组织匀浆液：按组织匀浆液(6×)：蒸馏水=1：5的比例稀释，即得。
2、制备样品提取液：清洗干净新鲜蔬菜或水果，用布或吸水纸吸干表面水分或自然晾干。称取5g，加入5ml的1×组织匀浆液，置于组织捣碎器中打成浆状，滤纸过滤，滤液倒入50ml容量瓶内，滤渣可用1×组织匀浆液重复匀浆1~2次，合并滤液倒入容量瓶内，定容滤液总体积至50ml。
3、配制VitaminC标准液：取少量1×组织匀浆液加入10mgVitaminC标准中，充分混匀，然后完全转移至1×组织匀浆液，即为VitaminC标准液(0.1mg/ml)。注意：溶解应完全、准确，否则有可能导致标准液不准确，配制的VitaminC标准液4℃避光保存，4周有效(临用前配制)。
4、配制二氯-酚靛酚标准液：取少量二氯-酚靛酚稀释液加入50mg二氯-酚靛酚中，充分混匀，然后完全转移至二氯-酚靛酚稀释液中，并定容至250ml，即为二氯-酚靛酚标准液(0.2mg/ml)。注意：溶解应完全、准确，否则有可能导致标准液不准确，配制的二氯-酚靛酚标准液4℃避光保存，1周有效。
5、标定二-氯酚靛酚标准液：准确吸取1mlVitaminC标准液(0.1mg/ml)，置于三角烧瓶中，加入9ml1×组织匀浆液，用微量滴定管以二氯-酚靛酚标准液进行滴定，直至呈现淡红色，并保持15s不褪色，即为滴定终点，记录染料的用量(V1)；另取一个三角烧瓶，
用1×组织匀浆液10ml做空白对照，按相同方法滴定，记录染料的用量(V2)，由于1mlVitaminC标准液含量是已知的，即0.1mg；由所用二氯-酚靛酚标准液的体积可计算出1ml二氯-酚靛酚相当于VitaminC的毫克数，即滴定度T(重复3次，取平均值)。
6、维生素C样品滴定：准确吸取滤液10ml置于100ml三角烧瓶内，按相同方法滴定，记录染料的用量(V3)(重复3次，取平均值)。

注意事项：
1、组织匀浆液(6×)久置或低温保存，容易产生乳白色浑浊；如果白色浑浊不明显，可以直
接使用，不影响效果；如果白色浑浊较多，应弃用。
2、配的VitaminC标准液4℃避光保存，4周有效(临用前配制)，也可-20℃保存。
3、配的二氯-酚靛酚标准液4℃避光保存，1周有效；如有条件可称取二氯-酚靛酚10mg，
加入二氯-酚靛酚稀释液并定容至50ml后使用，可避免浪费试剂。
4、本产品提供的组织匀浆液可用于大部分的蔬菜和水果等样品，可抑制抗环血酸氧化酶活性。
5、松针类样品宜用1%盐酸溶液提取。
6、若样品中含大量Fe2+，可用8%醋-酸溶液提取，Fe2+不会很快与染料起作用。
7、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃避光保存，3天内稳定。
8、样品切碎的过程中，尽量避免与铁器、铜器接触，并且尽量迅速。
9、某些水果、蔬菜浆状物泡沫太多，可滴加数滴丁醇或辛醇等。
10、如用干滤纸过滤，应弃去起初的数毫升滤液，也可离心取上清。
11、如果浆状物不易过滤，可低速离心，留取上清液进行滴定。
12、样品提取液要避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。
13、如果提取物中含有较多色素，可用白陶土脱色过滤后再滴定，或加入1ml氯仿，到达滴定终点时，氯仿层呈现淡红色。也可采用二甲苯萃取比色法进行测定。
14、如果样品是流质（如橙汁等），则无需研磨，直接取5ml汁液，加入等量的1×组织匀浆液混匀后滴定即可。
15、为了防止还原型维生素C被氧化，滴定应迅速，一般不超过2min。
16、滴定所用的二氯-酚靛酚标准液一般控制在1~4ml之间，2ml左右。
17、滴定开始时二氯-酚靛酚标准液应迅速加入，随后尽量一滴一滴的加入，并不断摇动三角烧瓶，直至呈粉红色，且保持15s不褪色，这样可以减少其他杂质的干扰。
18、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

附录：该试剂盒提供的试剂均经严格称量或容量瓶定容，如果试剂盒开封使用后或可考虑VitaminC标准液不再标准时，尤其是配制VitaminC标准液后，放置过久，可以考虑重新标定VitaminC标准液含量。其方法如下：

将VitaminC标准液(0.1mg/ml)用1×组织匀浆液稀释至0.02mg/ml，取VitaminC标准液(0.02mg/ml)5ml置于三角烧瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml，1%淀粉指示剂3滴，再以0.001mol/L碘-酸钾标准液进行滴定，终点为蓝色。